SN_T 3589.6-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法 第6部分：金枪鱼成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3589.6—2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第6部分：金枪鱼成分检测实时荧光 PCR法Identification of fish species in export food--Part 6 :Detection of tuna fish ingredient-Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3589.6—2013前言SN/T3589《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法》共分为以下7个部分：第1部分：石斑鱼成分检测实时荧光PCR法；第2部分：安康鱼成分检测实时荧光PCR法；第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光PCR法；第4部分：河豚鱼成分检测实时荧光PCR法；第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法；第6部分：金枪鱼成分检测实时荧光PCR法；第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3589的第6部分。本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：林超、孙敏、高宏伟、刘彩霞、陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、邓婷婷、孙雯娴。 SN/T 3589.6--2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第6部分：金枪鱼成分检测实时荧光PCR 法1 范围SN/T3589的本部分规定了出与食品中金枪鱼成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品中大目金枪鱼（Thumnus obesus）、黄鳍金枪鱼（Thunnus albacares）和长鳍金枪鱼（Thunnus alalunga）等金枪鱼及其制品鉴伪的定性检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少钠。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版木(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1金枪鱼Thunnus）大型远洋性重要商品食用鱼的统称。金枪鱼（Thunnus），鲈形目（Perciformes）科（Scombridae）见于世界暖水海域，与、、马鲛等近缘，通常隶科。常见被称为金枪鱼的商品鱼类有大眼金枪鱼（Thunnus obesus）、长鳍金枪鱼（Thunnusalatunga）、黄鳍金枪鱼（Thinnus albacares）、蓝鳍金枪鱼(Thunnus thynnus)和飞鱼(Katsuuus pelamis)3.2实时荧光 PCR real-time PCR在PCR反应体系中加人特异性的荧光探针。该探针为一寡核苷酸，与靶序列互补，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬火荧光基团。PCR扩增时，Tag 酶的 5→3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。利用荧光信号的积累实时监控整个 PCR扩增过程。3.3Ct 值 cycle threshold value每个实时荧光PCR反应管内的荧光信号达到设定的阅值时所经历的循环数。4缩略语下列缩略语适用于本文件。SDS:十二烷基硫酸钠(sodium docecyl sulfate)1 SN/T 3589.6—2013DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dATP:脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinc triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate）dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)DTT:二硫苏糖醇(dithiothreitol)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene dia minetetraacetic acid)ROX:羧基-X-罗丹明(carboxy-X-rhoda mine)Taq 酶：Taq 酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus（Taq）中分离出的具有热稳定性的 DNA聚合酶。TAMRA:羧基四甲基罗丹明(carboxy-tetramethyl-rhoda mine)Tris:三（羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl）a minomethane]UNG酶:尿嘧啶 DNA-糖基化酶（Uracil-N-glycosylase）5方法提要提取