SNT 2497.13-2010进出口危险化学品安全试验方法 第13部分：荧光原位杂交试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.13—2010进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 13 : Florescence in-situ hybridization2010-03-02发布2010-09-16实施OR中华人民共和国发布最技 197015 试真国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2497.13--2010前言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29.部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验;第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；第 9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；-第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；-第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19 部分:Northern Blot 实验;第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分:DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第 27部分：流式细胞术检测凋亡;第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第13部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、韩伟、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 2497.13--2010进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品荧光原位杂交试验的主要试剂和材料、主要仪器、试验步骤、试验结果和试验报告。本部分适用于进出口危险化学品荧光原位杂交试验。2术语、定义和缩略语2.1术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1. 1核酸探针 nucleic acid probe能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。2.2缩略语下列缩略语适用于本部分。2.2.1DAPI 4’,6-diamidino-2-phenylindole4,6-联-2-苯基吲哚2.2.2PBS磷酸盐缓冲液2.2.3PI Propidium Iodine 碘化丙啶3原理荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization，简称 FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常组织样本进行检测。4主要试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。4.1 PBS:在 800 mL 蒸馏水中溶解 8 g NaCl,0.2 g KCl,1.44 g NazHPO4 和 0.24 g KHzPO4,用 HCl调节溶液的 pH值至 7.4,加水定容至1 L,在 1.034×105 Pa(151 bf/in²)高压下灭菌 20 min，保存于室温。4.220XSSC:在800 mL水中溶解175.3g NaC1和88.2g柠檬酸钠，加人数滴10 mol/L NaOH溶液调节 pH 值至 7.0,加水定容至 1 L,分装后高压灭菌。4.32XSSC,由 20X SSC溶液稀释而成。4.4变性液:4mL 20×SSC;8mL蒸馏水;28 mL甲酰胺。每次新鲜配制。4.5杂交液：5×SSC,50%甲酰胺(5×Denharts，100 μL待检 DNA,10%硫酸葡聚糖）。 SN/T 2497.13—20104.6杂交后洗涤液:20XSSC 4 mL,蒸馏水 16 mL,甲酰胺20 mL。每次新鲜配制。4.7梯度乙醇。4.8 1XPBD:4X SSC/0.05%Tween 溶液。4.9