SN_T 4810-2017进出口食用动物β-内酰胺类药物残留量的测定 放射受体分析法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4810--2017进出口食用动物β-内酰胺类药物残留量的测定放射受体分析法Determination of β-lactams residues of live animals for import and export-Radio-receptor assay method2017-07-21发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4810—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孟日增、康明芹、宋屿竹、刘韬、刘金华、张旭光、曲辉、王嘉祺、石建平。 SN/T出口食用动物β-内酰胺类药物残留量的测定放射受体分析法1范围本标准规定了进出口食用动物血液和尿液中β-内酰胺类抗生素残留的检测方法。本标准适用于进出口食用活动物中β-内酰胺类6种抗生素（青霉素G、阿莫西林、氨芊青霉素、头孢霉素、头孢噻、邻氯青霉素)残留量的筛选检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理本方法的测定原理是药物功能团与微生物受体位点的结合反应，这些位点与某一类种抗生素的共有功能团相关，应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。当样品中含有β-内酰胺类抗生素时，样品中的β-内酰胺类抗生素残留物与受体试剂中相应受体的结合位点结合，从而阻止了[14CI标记的青霉素G与受体试剂位点结合。样品中β-内酰胺类药物含量越高，竞争的结合位点越多，[1*C]标记的青霉素G结合的则越少，用液体闪烁计数仪测定样品中[14CI含量的cpm值（countper-minute，即每分钟脉冲数)越低。样品中β-内酰胺类抗生素残留量与cpm值成反比。4试剂和材料4.1β-内酰胺类抗生素 Charm-II 测定试剂盒（MRL Sequential Assay）：药片标识为 P。4.2阴性对照样品：经证实不含β-内酰胺类抗生素的基质浓缩干粉，贮存2℃～6℃。4.3MSU多抗生素浓缩标准品：含有青霉素 G、阿莫西林、氨芊青霉素、头孢霉素、头孢噻呋、邻氯青霉素等多种抗生素的标准品。使用时用10 mL水溶解，充分摇匀，配成MSU多种抗生素标准溶液（其中青霉素 G浓度为1000 μg/kg）。4.4MSU萃取缓冲液浓缩干粉：使用时用1000 mL水溶解，可于2℃～6℃贮存 2个月。4.5M2缓冲液浓缩干粉：使用时取浓缩干粉用50mL水溶解，配制成M2缓冲液，可于2℃～6℃贮存2个月。4.6闪烁液。4.7硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。4.8具塞塑料离心管：50 mL。1）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有不同，须经实验评估后采用。1 SN/T 4810—20174.9水：符合 GB/T 6682二级水的规定。5仪器和设备5.1液体闪烁计数仪：CharmⅡ7600分析仪。5.2分析天平：感量为0.1g和0.1 mg。5.3组织匀浆器。5.4离心机：转速可达到2000g。5.5涡旋混合器：可振荡与加热。5.6 微量移液器:20 μL～100 μL,200 μL～1 000 μL、1 000 μL～5 000 μL。5.7恒温加热器:65℃士2℃,35℃±1℃。6分析步骤6.1i试样制备与保存6.1.1试样制备尿液：新鲜澄清尿液可直接使用，若混浊应离心去除沉淀物，取上清。血液：全血凝固后取血清。6.1.2试样保存试样可于18℃以下保存，新鲜样品可在2℃～6℃贮存24h。6.2检测方法6.2.1对照液的配制阴性对照液的配制:取 2 mL阴性组织液，,加人 6 mI.MSU萃取缓冲溶液中混匀，制成阴性对照液，该对照液可在室温下保存6 h。阳性对照液的配制：取0.3m.MSU多种抗生素标准溶液，加人6mL阴性组织液中混匀，然后从中取2 mL混合溶液加人到 2 mL MSU萃取缓冲溶液中混匀，制成 25 ug/kg 阳性对照液，该对照液可在室温下保存 6 h。6.2.2试样提取取50mI清洁离心管，并标明标记。移取2.0mL尿液或者血清样品添加到50mL离心管内，加人30mLMSU萃取缓冲溶液到离心管，涡旋振荡 5 min。置80℃士2℃孵育器内孵育30min后置冰水内10min。于1750g离心10min后，吸出上清液恢复室温，用pH试纸条检查pH是否为7.5,如不准确则用M2缓冲液或0.1mol/L盐酸调整至pH7