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* 负染色技术的应用 四. 透射电镜相关技术 当前第63页\共有98页\编于星期四\13点 * 负染色技术的应用 四. 透射电镜相关技术 来自于加州一位患者的H1N1流感患者样本的病毒透射电镜照片,4月28日 from美国疾控中心(CDC) 经过处理后,病毒的超微结构更将明显地显露出来。 当前第64页\共有98页\编于星期四\13点 * 负染色技术的应用 四. 透射电镜相关技术 CDC发表的1976年流行的猪流感病毒照片 1918流感病毒即为西班牙流感病毒 当前第65页\共有98页\编于星期四\13点 * 4. 免疫电镜技术 免疫电镜技术 是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学 主要使用的示踪物:重金属(如胶体金) 酶(如HRP) 四. 透射电镜相关技术 当前第66页\共有98页\编于星期四\13点 * 免疫电镜技术类型 主要分为两大类: 免疫凝集电镜技术:即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察 免疫电镜定位技术:利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子显微镜下观察,由标示物指示出相应抗原所在的部位 四. 透射电镜相关技术 当前第67页\共有98页\编于星期四\13点 * 免疫凝集 免疫电镜定位 当前第68页\共有98页\编于星期四\13点 * 五. 细胞超微结构简介 细胞膜及特化结构 细胞核 细胞器 当前第69页\共有98页\编于星期四\13点 * 电子照明系统 成像系统 观察记录显示系统 电子光学系统 一. 透射电镜基本结构 当前第31页\共有98页\编于星期四\13点 * 阴极 控制极 阳极 电子束 聚光镜 样品 1.电子照明系统 — 电子枪,聚光镜 一. 透射电镜基本结构 电子枪 当前第32页\共有98页\编于星期四\13点 * 电子枪 —— 电子束的发射源。 常用的是发夹形热钨丝三电极式电子枪。灯丝(阴极)由钨丝制成,通电加热后发射电子发射出的电子束受处于负电位的栅极所调制,并被阳极的高电位(几十~几百千伏)区加速后形成一束“光源”,即电子源。 另外还有六硼化镧阴极、点阴极和场发射电子枪等几种高亮度新型电子枪。 一. 透射电镜基本结构 当前第33页\共有98页\编于星期四\13点 * 聚光镜 —— 一种电磁透镜,由外包铁壳的线圈形成。当线圈中通有电流时,铁壳的缝隙处集中产生磁场,控制电子束的运动。 聚光镜的作用是将电子枪发出的电子流会聚后照射到样品上。 一. 透射电镜基本结构 当前第34页\共有98页\编于星期四\13点 * 2. 电子成像系统 —— 样品及样品以下的电磁透镜 样品 经特殊制备的超薄样品被放在直径3mm的载网上,再把载网放在支架上并插入透射电镜中。 样品架可以平移、倾动和旋转。 一. 透射电镜基本结构 当前第35页\共有98页\编于星期四\13点 * 样品以下的电磁透镜—— 物镜、中间镜和投影镜 改变各透镜电流可以在很大范围内改变图像的大小 图像的聚焦是靠调节物镜电流来实现的 物镜是整个仪器中最重要的部分,它决定电镜分辨率 一. 透射电镜基本结构 当前第36页\共有98页\编于星期四\13点 * 人眼无法观测电子,TEM中的电子信息通过荧光屏和照相底版转换为可观察图像。 3. 观察记录显示系统 上图为我室透射电镜安装的侧插式数码成像系统——SIS Megaview Ⅲ 一. 透射电镜基本结构 当前第37页\共有98页\编于星期四\13点 * 真空系统 一. 透射电镜基本结构 由机械泵、油扩散泵、离子泵、真空测量仪表及真空管道组成。它的作用是排除镜筒内气体,保持一定的镜筒真空度。 如果真空度低的话,电子与气体分子之间的碰撞引起散射而影响衬度,还会使电子栅极与阳极间高压电离导致极间放电,残余的气体还会腐蚀灯丝,污染样品。 当前第38页\共有98页\编于星期四\13点 * 电源系统 一. 透射电镜基本结构 当前第39页\共有98页\编于星期四\13点 * 操作控制系统 一. 透射电镜基本结构 当前第40页\共有98页\编于星期四\13点 * Image Sample Objective Lens (Illumination Source) Lump O M Condenser Lens Projection Lens Screen Image Image Sample Sample Objective Lens Electron
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