SNT 2497.2-2010进出口危险化学品安全试验方法 第2部分：空斑形成细胞试验（PFC）.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.2—2010进出口危险化学品安全试验方法第 2 部分：空斑形成细胞（PFC)试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 2 : Plaque forming cell assay2010-03-02 发布2010-09-16 实施中华人民共和国发布轮国家质量监督检验检疫总局厂数码防伪 SN/T 2497.2-2010前 言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：-第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验;第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；-第5部分：睾丸细胞UDS试验；-第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；-第9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；-第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；-第18部分：DNA加合物的检测方法；第 19 部分:Northern Blot 实验;第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497的第2部分。本部分修改采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南 NO.490《空斑形成细胞试验》,其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、彭梓、张园、熊中强、张颖。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2497.2—2010进出口危险化学品安全试验方法第 2部分：空斑形成细胞（PFC)试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验方法空斑形成细胞试验的试验原理、试验材料、试验程序和试验结果。本部分适用于检测进出口危险化学品经一次或反复多次接触受试物后，对试验动物体液免疫功能的影响。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1空斑形成细胞试验plaque forming cell assay体外检测和计数产生 IgM、IgG等 Ig 抗体形成细胞的一种方法，把含有空斑形成细胞悬液与羊红细胞悬液混合,将其均匀地悬于半固体琼脂培养基或液体培养基中,在补体的参与下,在红色背景上可见到透明区，即是抗羊红细胞IgM空斑形成细胞。2.2体液免疫humoral immunityB淋巴细胞在抗原的刺激下,增殖分化成浆细胞，浆细胞产生并分泌抗原特异性抗体的过程。3试验原理空斑形成细胞试验（简称PFC试验），是检测和计数产生 IgM、IgG 等Ig 空斑形成细胞的一种方法，由于试验具有特异性高、筛检力强、不需要特殊的仪器设备等优点，故可作为判断外源化学物对机体体液免疫功能影响的指标。将经羊红细胞(SRBC)免疫 4 d～5 d 的小鼠脾脏制成单个细胞悬液,在半固体琼脂凝胶介质中与SRBC混合，在平皿或玻片上铺成薄层，置37℃温育，在有补体参与下，使分泌抗体的淋巴细胞致敏周围的 SRBC产生溶血反应,在其周围形成一个肉眼可见的透明溶血区,称为溶血斑。该方法检出的细胞主要是IgM空斑形成细胞。为检测分泌抗羊红细胞的IgG抗体形成细胞，需要加入抗IgG的抗体，以使羊红细胞在加人补体后溶解。材料及试剂4Hanks 液、SA缓冲液；-新鲜羊红细胞；-豚鼠血清;-琼脂糖(凝固点42℃);一清洁玻片；一试管；一平Ⅲ;-不锈钢筛网； SN/T 2497.2—2010微量取样器；恒温水浴箱；温箱；有凹槽的玻片架。5试验程序5.1＇试验动物5.1.1选择健康成年小鼠，常用昆明、LACA、BALB/C 等品系，雌性与雄性动物均可，鼠龄在 6 周龄一8 周龄。5.1.2动物室温度应维持在22℃,±3℃相对湿度为-30%70%,选用常规饲料，自由进食及饮水。5.2 剂量与分组5.2.1染毒剂量：染毒组一般设3个剂量组，高剂量