SCT 3029-2006水产品中甲基睾酮残留量的测定 液相色谱法.pdf

ICS 67.050B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 3029—2006水产品中甲基睾酮残留量的测定液相色谱法Determination of methyltestosterone residues in fishery productsLiquid chromatography method2006-07-10 发布2006-10-01实施中华人民共和国农业部萧发布i SC/T 3029—2006前 言本标准附录 A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：中国海洋大学、国家水产品质量监督检验中心。本标准主要起草人：林洪、江洁、李兆新、曹立民、付晓婷。I SC/T 3029—2006水产品中甲基睾酮残留量的测定液相色谱法1范围本标准规定了水产品中甲基睾酮残留量的液相色谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中甲基睾酮残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理以乙醚提取样品中的甲基睾酮,经过液-液萃取,用 C8柱进行色谱分离,利用甲基睾酮具有紫外特征吸收,外标法定量。4 试剂所有试剂应无于扰峰,分析纯试剂应重蒸。水应符合 GB/T 6682一级水的要求。4.1甲基睾酮标准品：纯度≥98%。4.2甲醇：色谱纯。4.3甲醇溶液：甲醇:水=4:1。4.4石油醚：分析纯。4.5无水乙醚：分析纯。4.6甲基睾酮标准储备液:准确称取甲基睾酮0.0010g,用甲醇溶解,定容于 50 mL容量瓶中,使成浓度为20μg/ml的标准溶液，一18℃存放,存放时间不超过6个月。4.7甲基睾酮标准工作液:使用前用甲醇稀释成 1 ug/mL工作液,可 4℃暂时存放。5仪器5.1液相色谱仪：配紫外检测器。5.2电子天平：感量0.0001g。5.3 匀浆机。5.4磁力搅拌器。5.5离心机:最大转速5000r/min。5.6振荡器。5.7 减压旋转蒸发器。5.8鸡心瓶:50mL。1 SC/T 3029--20065.9具塞玻璃离心管:10 mL。5.10 离心管:50mL。5.11聚四氟乙烯膜:孔径0.45 μm。6操作方法6.1样品处理取水产品可食部分,切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀,充分勾浆,取5.00g(精确到0.01g)于50mL烧杯中。6.2分离纯化6.2.1 提取向烧杯中加人15mL乙醚，磁力搅拌15min,转移至50mL离心管中，用5mL乙醚洗净烧杯，合并至离心管，5000r/min离心10min，所得上清液转移至鸡心瓶；残渣用15mL乙醚按上述方法再提取一次,所得上清液合并至鸡心瓶,在 40℃左右水浴条件下减压旋转蒸发至干,残渣中加人5mL甲醇溶液清洗瓶壁,溶液转移至10mL具塞玻璃离心管中。6.2.2纯化加人 4 mL的石油醚至上述离心管中,加塞剧烈振荡1 min～2min,4 000 r/min离心10min,用滴管吸弃上层石油醚层；下层加入4mL,的石油醚按上述方法再洗涤一次。下层甲醇溶液在40℃左右水浴条件下减压旋转蒸发至约0.5mL,转移至10mL具塞离心管。加入2mL水清洗瓶壁，合并水溶液，加人4mL的乙醚,震荡1min～2min,混匀，4000 r/min离心10 min,吸取上层乙醚层于鸡心瓶中；下层用4mL乙醚再提取一遍,吸取上层,合并至鸡心瓶中。在40℃左右水浴条件下减压旋转蒸发至干,准确加人1mL流动相溶解残渣。经聚四氟乙烯膜过滤,待上机分析。6.3测定6.3.1测定条件色谱柱:Clg柱,250mm×4.6mm,柱填料粒径5um;或相当者。流动相:甲醇:水=70:30;流速:0.8mL/min。 柱温:30℃。进样量:20μL。检测波长:254nm。6.3.2色谱分析分别注人20μL浓度为1μg/mL标准工作溶液和样品提取溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析,记录峰面积,响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录 A。7结果7.1 计算样品中甲基睾酮的含量按公式(1)计算。A × Cs × V×1 000Y二(1)AsXm式中:-样品中甲基睾酮含量,单位为微克每千克(μg/kg);X --一一标准溶液中甲基睾酮含量,单位为微克每毫升(μg/mL);Cs2 SC/T 3029—2006A试样液中甲基睾酮的峰面积;V—-样品提取物溶液体积,单位为毫升(mL