甘薯中花青素含量的测定 液相色谱—串联质谱法.pdfVIP

甘薯中花青素含量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了甘薯中矢车菊色素、芍药素、天竺葵色素、锦葵色素、矮牵牛色素、飞燕草色素共6 种花青素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于甘薯薯块、叶片中花青素含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度 （正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度 （正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再 现性的基本方法 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 甘薯中花青素主要以花色苷的形式存在。试样经甲醇-水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴 将花色苷水解成花青素，用液相色谱-串联质谱法测定，以特征离子对和保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T6682 规定的一级水。 4.1 甲酸 （CH O ，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。 2 2 4.2 甲醇 （CH OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。 3 4.3 乙腈 （C H N，CAS 号：75-05-8）：色谱纯 2 3 4.4 盐酸 （HCl，CAS 号：7647-01-0）：优级纯。 4.5 提取液：取50mL 甲醇、39.2mL 水和 10.8mL 盐酸混匀。 4.6 10%甲酸甲醇溶液 （体积比）：取2mL 甲酸、18mL 甲醇混匀。 4.70.5%甲酸-水溶液 （体积比）：取200mL 水，加入 1mL 甲酸 （4.1）。 4.80.1%甲酸-乙腈溶液 （体积比）：取200mL 乙腈 （4.3），加入0.2mL 甲酸 （4.1）. 4.9 氯化天竺葵色素 （Pelargonidin Chloride）：CAS 号134-04-3，纯度≥96。 4.10 氯化矢车菊色素 （Cyanidin Chloride）：CAS 号528-58-5，纯度≥96。 1 4.11 氯化芍药素 （Peonidin Chloride）：CAS 号134-01-0，纯度≥96。 4.12 氯化锦葵色素 （Malvidin Chloride）：CAS 号643-84-5，纯度≥96。 4.13 氯化矮牵牛色素 （Petunidin Chloride）：CAS 号1429-30-7，纯度≥96。 4.14 氯化飞燕草色素 （Delphinidin Chloride）：CAS 号528-53-0，纯度≥96。 4.15 单标储备溶液 使用分析天平分别准确称取氯化天竺葵色素 （Pelargonidin Chloride）、氯化矢车菊素 （Cyanidin Chloride）、氯化芍药素 （Peonidin Chloride）、氯化锦葵色素 （Malvidin Chloride）、氯化矮牵牛色素 （Petunidin Chloride）、氯化飞燕草色素（Delphinidin Chloride）标准品1mg（精确至0.1mg），用1mL 10% 甲酸甲醇溶液 （4.6）作为溶剂溶解，即为1mg/mL的单标储备液，-20 ℃环境条件下，贮存于密闭的棕 色玻璃瓶中，保存有效期为3个月。 4.16 混合标准使用液 用10%甲酸甲醇溶液 （4.6）作为溶剂分别将单标储备液 （4.15）稀释成0.1mg/mL，放入1.5mL棕 色进样瓶中，作为使用液。 将6种使用液混合配制，氯化矢车菊色素、氯化芍药素使用液逐步稀释成0.1μg/mL、0.5μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL，氯化天竺葵色素、氯化锦葵色素、氯化矮牵牛色素、氯化飞燕草色素标品 稀释成0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2 μg/mL、0.5μg/mL，作为混合标准溶液。现配现用。 4.17 滤膜：0.22 μm，有机相滤膜。 5 仪器与设备 5.1 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源 （ESI）。 5.2 分析天平：感量0.1mg。 5.3 离心机：转速不低于8000