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实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告
实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。
实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H2O2与4-氨基安替比林和DHBS反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。
胆固醇酯+ H2O胆固醇+脂肪酸
胆固醇+O2△4胆甾烯酮+ H2O2
H2O2+4-氨基安替比林+DHBS醌亚胺+ H2O
实验步骤：
1、取2支试管分别加入0.2mL的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H”和“SH”试管。往每支试管加入0.2mL的沉淀剂，在室温下静置15min，用2000rad/min的离心机分离10min。
2、准备5支试管分别标注为“T”（总胆固醇）、“H”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST”（标准总胆固醇）、“SH”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL）
试管
T
ST
H
SH
B
上层清液
—
—
0.2
0.2
—
血清
0.02
—
—
—
—
标准胆固醇
—
0.1
—
—
—
蒸馏水
0.18
0．1
—
—
0.2
酶试剂
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
3、准备好以上试管后，充分混合并在37。的温度下放置20min，用波长520nm的分光光度计测量各支试管的吸光度值。
实验结果：
试管
T
ST
H
SH
吸光度值
0.167
0.252
0.605
0.430
计算公式：总胆固醇=××50
高密度脂蛋白胆固醇=×50
代入数据得：总胆固醇=××50=165.7（mg/dL）
高密度脂蛋白胆固醇=×50=70.3（mg/dL）
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