薯类种子生产基本技术—薯类种子脱毒的基本操作.pptx

;目录;一、准备工作 1.仪器设备与热源 2.培养瓶及封口材料;一、准备工作 3.母液与药品;二、培养基制备过程 （一）制备流程 确定配方和配制量→计算各种母液和药品用量→称量（或量取）→溶解→定容→调pH→分装→封口→标记→ 灭菌。 ;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 1.确定配方和配制量 2.计算 C1V1=C2VX ， VX= V1（C1 /C2 ） =V1/扩大倍数 C1 ：培养基中某种物质的浓度 C2 ：母液中某种物质的浓度 V1：配制培养基的体积 VX ：需要该种物质母液的体积;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 3.称量、混合 称量蔗糖与琼脂，量取母液，混合。;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 4.补水、加热、使琼脂熔化 3/4V-9/10V,加热，边加热边搅拌至琼脂溶解 5.定容、测调PH 定容至V，PH 6.0-6.5，0.1-1mol/L NaOH/HCl调节,高温灭菌PH下降0.5。;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 6.分装、封口 1/5-1/4V，1-2cm厚，封口，瓶盖松紧适中 7.标记;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 8.灭菌 （1）设备与方法 高压蒸汽灭菌锅及内外构造：温度表/压强表/压力表、安全阀、放气阀 注：干热灭菌（工具与玻璃容器）：160℃，3h;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 8.灭菌 （2）放气方法：一次放气法、二次放气法 （3）温度、压强与时间 121℃, 108kPa,121℃ -123℃, 15-30min;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 8.灭菌 （4）培养基的湿热灭菌过程: 检锅→加水→装物，盖锅盖→加热，排尽空气→关闭放气阀→升温至121℃开始计时，并适当调节热源，维持在121℃-123℃ 间15-30min→关闭热源→自然冷却至压强表指向“0” →先打开放气阀，再打开锅盖取物，冷却备用→倒去锅中余水。;二、培养基制备过程 （二）制备步骤 8.灭菌 注： 无菌培养基放于接种室或培养室冷却凝固备用，可预培养3天，看是否污染，1~2周内用完。;;目录;一、母液及其配制方法 （一）什么是母液 为了避免每次配制培养基都要称量各种化学药品，常常把培养基中必需的一些化学药品，按原量的浓度增大10倍、100倍或1000倍后称量，配成一种浓缩液，这种浓缩液就叫母液。;一、母液及其配制方法 （二）??制母液的优点 1.减少误差。 2.提高效率。 （三）母液配制方法 1.单独配制：单一化合物母液。 2.混合配制：混合化合物母液。;二、MS培养基母液配制 （一）大量元素母液的配制与保存 1.配制过程：10倍，10-1g的天平。 按顺序依次称量，逐一溶解于盛有600～700ml蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀，充分溶解后，注入1000ml容量瓶中，容器冲洗2~3次，洗液也注入，定容至 1 L，混合均匀，贴上标签，放于冰箱备用。 标签样式： ;二、MS培养基母液配制 （一）大量元素母液的配制与保存 2.保存：放于冰箱，4℃保存。 3.注意事项： （1）逐一溶解，前一个溶解完全，再放下一个，严格按顺序。避免产生沉淀。 （2）药品等级：化学纯CP（三级）及分析纯AR（二级） （3）天平感量：0.1g/0.01g/0.001g，即高于0.1g。 （4）蒸馏水;二、MS培养基母液配制 （二）微量元素母液的配制与保存 1.配制过程： 100倍，10-4g的天平。 按顺序依次称量，逐一溶解于盛有600～700ml蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀，充分溶解后，注入1000ml容量瓶中，容器冲洗2~3次，洗液也注入，定容至 1 L，混合均匀，贴上标签，放于冰箱备用。;二、MS培养基母液配制 （二）微量元素母液的配制与保存 1.配制过程： 100倍，10-4g的天平。 标签样式： 2.保存：放于冰箱，4℃保存。 注：CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O，可以另外配制，1000倍母液。;二、MS培养基母液配制 （三）铁盐母液的配制与保存 1.配制过程：100倍，天平10-3g。 按顺序依次称量，逐一溶解于盛有600～700ml蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀，充分溶解后，注入1000ml容量瓶中，容器冲洗2~3次，洗液也注入，定容至 1 L，混合均匀，贴上标签，放于冰箱备用。标签样式： 注：也可分别单独溶解 然后再混合，再定容。;二、MS培养基母液配制 （三）铁盐母液的配制与保存 2.保存：放于冰箱，4℃保存。 3.注意事项： 先Na2-EDTA充分溶解后，再FeSO4·7H2O，生成螯合铁，Fe 2+在PH6-8，仍以Fe 2+形式被吸收。 否则， 在PH﹥5.2时， Fe 2+ →Fe 3+→Fe（OH）3↓;二、MS培养基母液