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胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检验技术操作规程
1 范围
本文件规定了胚培养灭活疫苗的种鸡蛋的蛋重、蛋形、孵化率、蛋壳表面细菌含量、蛋内容物细菌
含量、卵黄抗体、病原7项检验方法及标准。
本文件适用于兽用生物制品生产企业对胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检测及质量考察。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本 (包括所有的修改单)适用于本
文件。
《中华人民共和国兽药典》2020年版 。
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义
4 主要技术内容
4.1 蛋重:
使用电子天平称重 (精度为0.1g),蛋重应控制在55g~65g之间。
4.2 蛋形:
肉眼观察应白色蛋壳,表面光泽无裂纹、沙皮、畸形。
4.3 孵化率:
将种蛋洗净、消毒后入孵化器孵化,温度控制在38℃~38.5℃之间,湿度控制在65%~70%之间,
每60分钟翻蛋一次,孵化6 日,用照蛋灯逐个照检,胚胎及血管发育正常为合格,孵化率应大于90%。
4.4 蛋壳表面细菌含量:
每批抽检 10枚种鸡蛋,分别用无菌棉拭子在蛋壳表面擦拭1cm2面积后马上折断棉拭子头放入准备
1
好的含10ml生理盐水的无菌瓶内,将无菌瓶放在振荡器上200r/min振荡10分钟,在超净工作台内分
别吸取0.1ml生理盐水,涂布于TSA培养基平板上,37℃培养48小时,统计菌落数,蛋壳表面细菌含
量应小于10CFU/cm 。2
4.5 蛋内容物细菌含量:
每批抽检 10枚种鸡蛋,打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄,按1:2加入无菌生理盐水用无菌组织捣碎机匀
浆,在超净工作台内分别吸取0.1ml生理盐水,涂布于TSA培养基平板上,37℃培养48小时,统计菌
落数,蛋内细菌含量应小于1CFU/0.1ml。
4.6 卵黄抗体:
每批抽检 10枚种鸡蛋,分离其卵黄,每枚卵黄抽取卵黄液2ml,加入2ml盐水,再加入3ml氯仿,
混匀37℃静置24小时,抽取上清液进行试验,测定非免疫鸡蛋中所含非免疫抗体,用PBS将被检卵黄
液稀释成不同倍数,加入1%鸡红细胞悬液,置室温20~40分钟,当对照孔中的红细胞呈显著纽扣状时
判定结果,以使红细胞完全凝集的最高稀释度作为判定终点,卵黄抗体效价应小于1:4。
4.7 外源病毒检测:
每批抽检 10枚种鸡蛋,打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄,用无菌组织捣碎机匀浆,分别用PCR方法检测
禽流感、鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、禽白血病、网状内皮增生症、鸡传染性法氏囊病6种病原,不
应有阳性结果。
5 检验记录
填写检验记录,并建立检验档案,内容包括:疫苗名称、厂家、批号、生产日期、有效期、保存温
度、运输方式、冰箱温度观察记录、分层观察记录以及相关检验人、复核人和检查时间,必要时可以拍
照留存电子记录。
2
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