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dehp对大鼠各组织器官的损伤 二聚苯二羧酸酯（2-ethyl）是塑料中最常见的酸酯增塑剂。过去一直认为酞酸酯类化合物毒性低且有良好的理化特性,而无限制地生产和使用。已有的研究表明,DEHP可通过多种途径进入生物体内,对许多器官和组织包括肝脏、肾脏、肺组织、心脏以及生殖器官造成损伤,并引发多种疾病。笔者通过大鼠体内染毒的方式,观察DEHP对大鼠心、肝、肾和睾丸造成的损伤。 1 材料和方法 1.1 测试方法 RM2135型切片机(莱卡公司),日本Olympus光学显微镜(可摄像并连接图像分析仪),DHP-9082型电热恒温箱(上海仪表厂),万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司),5 ml移液管,吸耳球,小烧杯,2.5 ml灌胃针带针头。DEHP试剂(浓度98%,Shore Road公司,产品批号:2042110),食用调和油,甲醛,无水乙醇,二甲苯,石蜡,Harris氏苏木素,Eosin伊红等。 1.2 dehp的急性毒性试验 6周龄清洁级健康雄性Wistar大鼠50只(购自南昌大学医学院实验动物科学部,动物及动物房合格证号:2002021,饲养平均温度为27~29℃,相对湿度50%~55%,体重(200±10)g。大鼠适应性喂养7 d后,采用随机分组方法,分为4个染毒组和1个阴性对照组,每组10只。采用灌胃染毒法,4个染毒组DEHP灌胃液剂量分别为1 500、3 000、4 500、6 000 mg/kg;DEHP用食用油配制成相同体积,阴性对照组每天灌胃相同体积的食用油,每天10:00时灌胃1次,每次2 ml,每4 d测一次大鼠体重,观察其精神、行为和皮毛状态,染毒28 d后,所有大鼠均用脊柱脱臼法处死。处死前,分别测量其体重,处死后分别取出心、肝、肾、睾丸,称量记录其湿重,计算脏器系数。脏器系数计算公式为:脏器系数(%)=脏器湿重/体重×100% 1.3 进行染色,进行微观观察 将取出的脏器放入10%的甲醛溶液中固定12 h,进行洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片,苏木素-伊红染色,中性树胶封片,加盖玻片,恒温箱中烘烤15 h后,置镜下观察并拍照。 1.4 数据处理方法 数据以表示,各组间数据比较采用Dunnett-t检验、相关分析及多组单因素方差分析,所有数据均用SPSS 12.0 for Windows统计软件处理,P0.05表示差异有统计学意义。 2 结果 2.1 阿斯匹林药毒组大鼠的异常现象 在实验过程中,溶剂对照组和1 500 mg/kg组的大鼠均未出现明显异常表现;3 000、4 500、6 000 mg/kg染毒组大鼠则有异常现象,大鼠接触DEHP后,在实验后期出现不同程度的行动迟缓,被毛疏松无光泽,6 000 mg/kg剂量组大鼠在处死时,被毛较其他各组易脱落。 2.2 dehp对大鼠体重的影响 由表1可见,大鼠在接触1 500、3 000、4 500和6 000mg/kg的DEHP 4 d后,有体重增长缓慢的现象,并均低于溶剂对照组,4 500和6 000 mg/kg组大鼠染毒24 d后,出现了体重停止增长且有体重减轻的现象。各组大鼠体重均数经方差分析可知,实验前各组大鼠体重均值基本相同,随时间变化,各组体重均值都有增加,对照组体重均数增长量最大,4个染毒组随DEHP浓度的升高,其体重均数有依次降低的趋势,各染毒组大鼠体重均数普遍低于溶剂对照组。染毒组的大鼠体重与对照组差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。 实验过程中,实验组大鼠的体重均数-时间曲线图呈波浪形变化,各组大鼠的体重随时间变化增长缓慢,体重增量依次减小,对照组大鼠的体重随时间变化为持续性升高,其体重均数-时间变化图呈直线样上升,未有明显波动出现。其中一组为1 500 mg/kg组,其体重曲线波动较小,体重变化趋势与对照组相似;随着染毒剂量升高,3 000~6 000 mg/kg组的大鼠的体重变化波动较大,体重均数-时间变化曲线趋于平缓,体重增长缓慢,甚至出现体重下降,说明低剂量的DEHP对大鼠损伤作用较小,剂量越大对大鼠的损害作用越强,体重波动越频繁,体重增量越小。 2.3 两组/体重、肝脏/体重、脏器/体重系数比较 由表2可见,染毒28 d后,各染毒浓度组大鼠其心脏/体重、肝脏/体重、肾脏/体重系数均高于对照组(P0.05,P0.01),都有增大的趋势。而睾丸/体重系数则小于对照组(P0.05,P0.01)。 2.4 dehp对大鼠肝组织的影响 镜下观察大鼠各组织切片发现,对照组大鼠的心、肝、肾、睾丸组织细胞正常。而染毒组大鼠各组织细胞都有受到不同程度的损伤,4 500、6 000 mg/kg染毒组大鼠各组织细胞受损更明显。2.4.1 DEHP对大鼠肝组织的影响1 500 mg/kg剂量组的大鼠肝细胞有轻度水肿,肝窦变窄