小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告.doc

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术 2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点 实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液 实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态） 实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。选取边缘较薄的肝组织0.5cm3，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗去血污 2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min） 3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。 4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察 实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色 分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色