微生物实验报告_4.doc

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 09级 临床心理 113200900140026 方海瑞 实验目的 = 1 \* GB3 ①实验课教学的主要目标是使我们了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。 = 2 \* GB3 ②培养我们自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。 = 3 \* GB3 ③掌握检测脓汁和粪便标本中病原菌的基本方法和操作 实验器材 常用设备：隔水式电热恒温培养箱 冷冻室 固定器材：试管架 酒精灯 污物盘 油性笔 打火机 奥林巴斯 CX21型生物显微镜 共用实验台：蒸馏水 1‰新洁而灭 玻片缸 消毒液 微生物器材柜（放微生物实验必备器材和试剂等） 此次实验专用器材：天平，干粉培养基，浓汁标本1支，粪便标本1支，碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把，伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个，斜面4支，细菌分离培养物（上次实验平板），斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 方法与步骤 培养基的制备干粉培养基 蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸、牛皮纸，用橡皮筋扎好 →放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室 ↓ 细菌的分离培养 接种环烧灼灭菌，接种环取液体标本经无菌取材后在平板划线（平板划线分离法） ↓ 细菌的纯培养 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→伊红美蓝平板→紫黑菌落→1支斜面 丁→伊红美蓝平板→粉红菌落→1支斜面 收集平板 → 灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置） → 速送灭菌室 → 高压蒸汽灭菌 → 洗刷。 ↓ 细菌的形态学检查 革兰染色方法步骤涂片：干燥 → 固定→结晶紫 → 初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗→稀释复红→复染1分钟→水洗→ 吸干,镜检。 细菌的糖发酵试验、动力试验 抗菌素敏感性试验（滤纸片扩散法） 凝固酶试验 结果与讨论 实验室总体结果与分析 甲 乙 丙 丁 普通平板 普通平板 伊红美蓝平板 伊红美蓝平板 黄、白色菌落 黄、白色菌落 紫黑、粉红菌落 粉红菌落 表格 SEQ 表格 \* ARABIC 1纯培养结果 甲（黄色） 乙（白色） 丙（紫黑） 丁（粉色） 青霉素 敏感 敏感 耐药 耐药 链霉素 敏感 敏感 敏感 敏感 庆大霉素 敏感 敏感 敏感 敏感 表格 SEQ 表格 \* ARABIC 2抗菌素敏感性试验结果 甲（紫黑） 乙（紫黑） 丙（粉红） 丁（粉红） 葡萄糖 产酸产气 / 产酸不产气 / 乳糖 / 产酸产气 / 不产酸不产气 半固体 扩散生长 扩散生长 沿接种线生长 沿接种线生长 表格3糖发酵、动力试验结果 黄色 白色 紫黑 粉红 革兰染色肉眼 阳性（紫色） 阳性（紫色） 阴性（红色） 阴性（红色） 油镜下观察 紫色，球形，呈葡萄串状排列 红色，杆状 红色，短杆状 表格 4革兰染色结果 黄色 白色 血浆凝固酶 阳性 阴性 表格 4血浆凝固酶实验 根据上述各项试验结果，可判断甲乙丙丁同学纯化培养的细菌分别为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、志贺菌。 个人（丙）实验结果与分析 在苏红美蓝平板培养基上肉眼可见紫黑和粉红的菌落，但菌落密集，分离不明显，很多地方都拧成了一块大的团状菌落，分不清那种是紫黑和粉红的菌落。这个很有可能是在平板划线分离操作不当引起的，划线次数不够，划线的角度太大或者划线的地区交叉重叠密集造成上述的结果。 从抗菌素药敏实验可以看出来，甲（黄色）和乙（白色）对青霉素和链霉素都敏感，为革兰氏阳性菌，而丙（紫黑）和丁（粉红）对青霉素耐药和对链霉素敏感，为革兰氏阴性菌。无论革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都对庆大霉素敏感，这就对我们医学工作中在临床上使用广谱抗生素有很大指导作用。 表格3糖发酵和动力实验结果—丙（粉红）葡萄糖产酸不产气，半固体穿刺接种沿接种线生长，根据常见肠道感染细菌主要生化反应特征，可以推断出，丙（粉红）菌落为福氏志贺菌。当然，为了更一步检验结果，还应该进行下一步革兰氏染色油镜镜检和血浆凝固酶实验。 通过了革兰氏染色结果—丙（粉红），阴性，红色，短棒状符合福氏志贺菌的特征。但还不能下定论，只能等待下一步血浆凝固酶实验。 表格4的血浆凝固酶实验结果显示实验组的结果为阳性，通过上面一步步的实验最终确定了丙（粉红）菌落为福氏志贺菌。结果来之不易，花费了大量的时间和复杂的工作，但这一切都是值得的