关节炎大鼠膝关节病理检测指标和解读.pdfVIP

样本： 大鼠完整膝关节 （骨性关节炎模型） 切片要求：具有完成膝关节，包括：软骨、软骨下骨、滑膜组织 主要染色方法包括：HE 染色、番红-固绿染色、免疫荧光（CXII ） 1. 滑膜组织 肉眼观察 ： 正常： 滑膜组织平滑闪亮、质薄柔顺，呈透明淡红色 模型组：滑膜组织充血、水肿严重、滑膜明显增厚、质地粗糙，呈现黄色 HE 染色观察： 正常：滑膜组织、滑膜内膜及滑膜内膜下层细胞排列整齐； 模型组：滑膜组织炎症细胞浸润 ，纤维组织增生、滑膜细胞增生 ，排列紊乱，滑膜组 织周边可见少量毛细血管增生。 滑膜组织 HE 染色例图： 1. 滑膜组织 2. 毛细血管增生（染成鲜红色的部分） 评估方法 ： 滑膜细胞（FLS ）增生程度：0 ，无滑膜细胞增生；1 ，FLS 轻度增生；2 ，FLS 中度增 生；3 ，FLS 重度增生。 血管增生程度 ：0 ，无血管增生；1 ，血管轻度增生；2 ，血管中度增生；3 ，血管重度 增生。 纤维组织增生程度 ：0 ，无纤维组织增生；1 ，纤维组织轻度增生；2 ，纤维组织中度增 生；3 ，纤维组织重度增生。 淋巴细胞浸润程度 ：0 ，无淋巴细胞；1 ，淋巴细胞轻度浸润；2 ，淋巴细胞中度浸润； 3 ，淋巴细胞重度浸润。 有无浆细胞浸润 ：有浆细胞浸润（+ ）；无浆细胞浸润（- ）。 a) 炎症细胞浸润评估方法和原理 炎症细胞特点：细胞核较大，核质比大，HE 染色后，细胞核被染成鲜明的蓝色，胞浆 染成粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。在 400 倍放大情况下， 可以明显看到以蓝色为主的点状的炎症细胞 （中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞） 其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，成蓝色或深蓝色 判断是否具有炎症及炎症的强弱： （1 ） 炎症细胞浸润的区域面积大的大小 （2 ） 高倍镜视野下平均炎症细胞的数量 量化评估方法： 通过 HE 染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞 浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1 ）HE 染色，在 400 倍下， 是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2 ） HE 的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量来评 价，并通过统计数据，做出柱状图来进行统计学比较。炎症细胞浸润区域的面积大小： 可以用 image pro-plus (IPP)软件来计算，首先用软件中的选择区域图标选出你的炎性 细胞浸润的区域，然后再点击 area count 计算该区域的面积，作为该张图片的炎性区 域的面积，依次类推，计算出 10 张同一组 HE 图片的面积，求平均值作为该处理组的 炎症反应的强度，用此法计算其他组炎症的强弱，进而比较。高倍视野下平均炎症细 胞的数量：计算方法类似，也可以用 image pro-plus (IPP)软件来计算，设置每个炎症 细胞的参数，然后统计。如若不会用 IPP 软件，只好用笨的方法，自己人工计数，然 后统计 2.软骨组织 HE 染色观察： 正常 ：软骨切线层连续且完整，细胞质和基质成分分布均匀且着色浅红，移行层中软 骨细胞纵向条索相连状分布且排列规律，辐射层、钙化层结构完整清晰 模型组: 切线层纤维方向出现偏移、变薄、软骨膜表层发生破坏，软骨细胞外漏且抱团 簇集生长，移行层与辐射层的软骨细胞呈无序分布排列状态，部分软骨细胞出现钙化， 钙化层软骨细胞钙化现象明显，钙化层与软骨下骨间的粘合线起伏较大，且连续想部 分中断 软骨组织 HE 和番红固绿染色结果