人教版教学课件实验大肠杆菌的分离和培养.ppt

课题1 微生物的利用; 了解有关微生物及培育基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培育。;微生物包括哪五类：;细菌的外形与大小;细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;细菌的营养类型 ;放线菌;链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素 ;病毒的结构;2、病毒的增殖：;真菌;;一、基础知识：;选择培育基;天然培育基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培育效果好 缺点：来源受限;成分简洁，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分;液体培育基：;固体培育基：菌落，菌苔;半固体培育基：;2.不同的微生物往往需要采纳不同的培育基配方 (参考教材附录内容);4.培育基的用途;二、无菌技术;　（１）消毒定义： 　　利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。;　　（2）灭菌的定义：;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭全部的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培育基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采纳高温干热灭菌。为了防止杂菌，格外是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采纳适宜的塞子塞口，通常采纳棉花塞，也可采纳各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;分类;3.微生物实验室培育的基本操作程序;1.无菌技术除了用来防止实验室的培育物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;三、实验操作;1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培育基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎; 8．灭菌: 将50ml培育基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培育基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培育基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯四周倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10．无菌检查： 将灭菌的培育基放入37℃的温室中培育24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;倒平板技术; 1.培育基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估量培育基的温度？;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;2、纯化大肠杆菌; 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 ;平板划线时不能划破培育基的缘由;;问题讨论; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;;;问题讨论;微生物的恒温培育;菌种的保存;四、课题成果评价 ;本课题知识小结:;【典例解析】;例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培育基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;编号;（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培育基可用于培育 。 （4）表中营养成分共有 类。 （5）不论何种培育基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。 （6）右表中各成分重量确定的原则是 。 （7）若右表培育基用于菌种鉴定，应该增加的成分 。课题1 微生物的利用