生物化学：酶完整版.pptVIP

　酶化学 1925年，Brigg 与 Haldane提出了“稳态假说”。 理论首先假设： 测定的速度为反应的初速度，即[S]消耗小于5%时的速度， 故[P]的生成量极少，由P+E重新生成ES的可能性不予考虑； [S]的浓度[E]，因此，ES的形成不会明显地降低[S]； 在测定初速度的过程中，[ES]在相当一段时间内保持恒定， 及ES生成的速度和ES消失的速度相等，达到动态平衡，即 “稳态”。 K-1 K2 第三节 酶促反应动力学 米氏方程的推导 平衡时： k1([Et]-[ES]) [S] k-1[ES]+k2[ES] 　酶化学 K-1 K2 [Et]-[ES] [S] [ES] k-1+k2 k1 =Km Km[ES]= [Et][S] - [ES][S] Km[ES] + [ES][S] = [Et][S] [ES] 整理得: k-1+k2 [Et][S]-[ES][S] k1 [ES] = = Km+[S] [Et][S] = 第三节 酶促反应动力学 米氏方程的推导 K-1 K2 [Et]-[ES] [S] [ES] 酶促反应速度由[ES]决定，V=k2 [ES] Km+[S] [Et][S] = V K2 [ES] = V K2 V = K2 Km+[S] [Et][S] [ES] = Km+[S] [Et][S] 当所有的酶都以ES的形式存在时，[ES]=[Et]，酶促反应速度最大Vmax，Vmax=k2 [Et]。 V = K2 Km+[S] [Et][S] Km+[S] V = Vmax Km+[S] [S] Km+[S] 米氏方程 Km称为米氏常数。 Vmax V S 当底物浓度较低时，Km[S] V = Vmax [S] Km 当底物浓度较高时，Km[S] V = Vmax [S] [S] = Vmax k-1+k2 k1 =Km 当反应速度等于最大速度一半时, 即V = 1/2 Vmax, Km = [S] 米氏常数是反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。因此,米氏常数的单位为mol/L。 三、底物浓度的影响和米氏方程 　酶化学 = Vmax Km+[S] [S] Vmax 2 Km=[S] 第三节 酶促反应动力学 米氏常数Km 的意义 物理意义：Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度； 重要特征物理常数，与酶浓度无关。不同的酶具有不同Km值，Km=10-6 -- 10-1mol/L； Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值; Km值近似等于[ES]的解离常数，可表示酶与底物之间的亲和力：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高; 同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。 k-1+k2 k1 =Km 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法 Km和Vmax的测定 y = kx + b X Y 1/Vmax -1/Km 利用双倒数作图法计算Km与Vmax 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 1/Vmax -1/Km Slope=Km/Vmax 在一定的pH下, 酶具有最大的催化活性,通常称此pH为最适pH。 一般：pH4－8； 植物和微生物：pH5.5-6.5 动物： pH6.5－8.0 四、 pH对酶作用的影响 　酶化学 pH V 最适pH 胃蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 第三节 酶促反应动力学 酶分子中促使底物发生化学变化的部位，决定酶所催化反应的性质。 一、酶的活性中心和必需基团 　酶化学 2．催化部位 catalytic site 第二节 酶催化机理 酶分子中存在着一些可以与其他分子发生某种程度结合的部位，从而引起酶分子空间构象的变化，对酶起激活或抑制作用。 三、酶的活性中心和必需基团 　酶化学 3．调控部位 Regulatory site 第二节 酶催化机理 酶表现活性不可缺少的基团 活性中心：结合、催化。 调节部位 维持三维空间结构的必需基团 三、酶的活性中心和必需基团 　酶化学 4．必