免疫室定量项目方法性能验证标准操作程序.doc

免疫室定量项目方法性能验证标准操作程序 目的 对免疫室检测项目进行性能验证，以保证所采用的相关试剂盒的分析性能能满足临床检测的要求和实验室检测结果的准确性。 范围 适应于免疫室开展的所有检测项目。 操作程序 验证前准备 仪器设备的准备： 根据免疫室仪器设备的维护保养程序, 验证前，实验人员或请仪器厂家工程师对验证过程中需要用到的仪器设备进行全面的维护保养，以确保所涉及的仪器设备在最佳运行状态。 试剂的准备 试剂盒的准备：验证前，确保足够用于验证的同批号试剂盒，如可能，可以再适当准备一些另一批号的试剂。 室内质控品的准备：按照《免疫室定量项目室内质控管理程序》规定的室内质控品购买和制备方法进行准备。 免疫室定量项目的验证方法 拟验证参数的确定 根据试剂盒说明书或行业内（如CLIA′88）要求制定拟验证的性能参数。免疫室定量项目需要验证的参数包括：精密度（批内、批间精密度）、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间、干扰、不同方法和仪器间的比对等。要求检测过程中采取质量控制措施，尽可能保证检测系统处于一个稳定状态。 批内精密度实验 标本来源：浓度分别处于正常和病理水平的混合的新鲜临床标本。 步骤：按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测相同的20份混合的新鲜临床标本。记录结果并计算均值、标准差和批内变异系数CV（%）： 表1：批内精密度检测结果记录 项目： 检测序号 检测结果 检测序号 检测结果 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 均值： 标准差： 批内变异系数CV（%） 验证结果判断标准 检测的批内变异系数CV(%)≤1/4 CLIA’88允许总误差或生物学变异 批间精密度实验 标本来源：浓度分别处于正常和病理水平的室内质控标本。 步骤：按照临床标本相同的检测方法，将室内质控标本连续检测20天。记录结果，计算均值、标准差和批间精密度CV（%）： 表2：批间精密度检测结果记录表 项目： 批次 检测结果 批次 检测结果 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 均值： 标准差： 批间变异系数CV（%）： 验证结果判断标准 检测的批内变异系数CV(%)≤1/3 CLIA’88或生物学变异允许总误差 正确度验证实验 免疫室对参加卫生部临检中心室间质评涵盖的项目进行正确度验证，以卫生部临床检验中心室间质评结果为依据，成绩在80%以上者即为验证通过。对未参加卫生部临检中心室间质评涵盖的项目进行正确度验证时，与其他实验室进行比对(比对实验室参加过该检测项目的室间质评，成绩满意)，验证符合率。 线性范围验证实验 标本来源：采用本实验室或其他实验室常规检测标本获得的高值及低值标本进行。 不同浓度样本制备：取高值和低值样本各一份，按如下配比: 标本1：低浓度样本； 标本2：三份低浓度样本与一份高浓样标本混匀； 标本3：二份低浓度样本与 二份高浓样标本混匀； 标本4：一份低浓度样本与 三份高浓样标本混匀； 标本5：高浓度样本。 检测时,按标本1,2,3,4,5,5,4,3,2,1排列，每个标本测量2次,记录浓度。以理论浓度为纵坐标（Y），实测浓度为横坐标(X)。由统计学计算出r2和回归方程式Y=aX+b。 表3：线性验证结果记录表 项目： 标本编号 第一次检测结果 第二次检测结果 平均结果 理论结果 1 2 3 4 5 回归方程： a r2 验证结果判断标准 r2≥0.95, a在0.97-1.03范围内，则判断为线性范围验证通过。 生物参考区间验证实验 选择年龄、性别等均匀分布, 符合建立生物参考区间的健康体检者血清标本20份，对不同项目的参考范围进行验证。 表4：生物参考区间结果记录表 项目： 标本号 检测结果 标本号 检测结果 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 验证结果判断标准 小于或等于1份标本结果超出生物参考区间,即为验证通过。 临床可报告范围验证： 本室临床可报告范围定义为：实验室能够给临床发出报告的最大检测范围。通常是在线性范围高值的基础上外延至最大稀释度倍数对应的值。 标本来源：含本项目浓度接近线性范围上限的临床新鲜标本。 验证方案：进行最大稀释度实验验证。实验操作时，以生理盐水或蒸馏水为稀释介质，每个稀释浓度检测两次取平均值与理论值进行比较。 表5：临床可报告范围记录表 项目： 稀释比例（原液：生理盐水或蒸馏水） 预期值 检测值1 检测值