计算病毒滴度方法（ReedandMench法）.pdfVIP

附：病毒滴毒的计算方法 1. 病毒毒价的测定 毒价单位：衡量病毒毒价(毒力) 的单位过去多用最小致死量(MLD) ，即经规定的途径，以不 同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。但由于剂量的递 增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近 100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。而一般在 死亡率越接近 50 ％时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定 单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡 的剂量。用鸡胚测定时，毒价单位为鸡胚半数致死量(ELD50)或鸡胚半数感染量(EID50) 。 用细胞培养测定时，用组织细胞半数感染量(TCID50) 。在测定疫苗的免疫性能时，则用半数 免疫量(IMD50)或半数保护量(PD50) 。 1) LD50 的测定( 以流行性乙型脑炎病毒为例) 。 测定方法：将接种病毒，并已发病濒死的小鼠，无菌法取脑组织，称重、加稀释液充 -1 分研磨，配制成 10- 1 悬液，3 000r/min 离心20 分钟，取上清液，以 10 倍递次稀释成 10 、 -2 -3 -9 10 、10 ……10 ，每个稀释度分别接种5 只小鼠，每只脑内注射0.03ml，逐日观察记录各 组的死亡数。 表2-24 LD50 的计算（接种剂量为0.03ml） 病毒稀释度 -4 -5 -6 -7 -8 -9 10 10 10 10 10 10 接种鼠数 5 5 5 5 5 5 活鼠数 0 0 1 4 5 5 死鼠数 5 5 4 1 0 0 死亡 15 10 5 1 0 0 积累总计 活鼠 0 0 1 5 10 15 死亡比 15/15 10/10 5/6 1/6 0/10 0/15 死亡率(%) 100 100 83 17 0 0  LD50 的计算：按Reed 和Muench 氏法计算。 距离比例= (高于50% 的死亡分数-50%) / (高于50% 的死亡百分数-低于50% 的死亡百分数) = (83%-50%) / (83% －17%) = 0.5 LD50 的对数=高于50%病毒稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数 本例高于50%病毒稀释度的对数－6，距离比例为0.5，稀释系数的对数为－1。代入上式： LgLD=-6+0.5×( －1)=－6.5 -6.5 -6.5 -6.5 则LD50=10 ，0.03ml，( 10 也写作 10E-6.5) ，即该病毒作 10 稀释，接种 0.03ml 能使半数小鼠发生死亡。 注意：稀释血清法中和试验，计算TCID50 或LD50 ，MID50 时，计算公式应改为：TCID50 的对数=高于50%血清稀释度的对数－距离比例×稀释系数的对数。  如按Karber 氏法计算，其公式为： IgLD50 （或TCID50 ）=L+d(S －0.5) L 为病毒最低稀释度的对数，d 为组距，即稀释系数，S 为死亡比值的和。 本例L= －4 ，d= －1，S=1+1+5/6+1