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接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口 正 确 错 误 当前第63页\共有65页\编于星期二\6点 瓶盖朝上放,接种完毕后立即盖好瓶口 正 确 错 误 当前第64页\共有65页\编于星期二\6点 接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生 当前第65页\共有65页\编于星期二\6点 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 培养架 当前第31页\共有65页\编于星期二\6点 恒温振荡培养箱 ?光照培养箱 当前第32页\共有65页\编于星期二\6点 5、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜 倒置显微镜 光学显微镜 当前第33页\共有65页\编于星期二\6点 1、玻璃器皿 三、培养器皿及实验用具 培养皿 三角瓶 培养瓶 当前第34页\共有65页\编于星期二\6点 2、金属材质用具 镊子 解剖刀 接种针 当前第35页\共有65页\编于星期二\6点 1、玻璃器皿洗涤 新购置玻璃器皿 1%稀HCl 浸渍12h 洗衣粉洗涤 清水冲洗 晾干备用 已用过的玻璃器皿 四、洗涤技术 当前第36页\共有65页\编于星期二\6点 清洗后器皿内外不可挂有水珠,否则重洗,若重洗后仍挂有水珠,则需用洗液浸泡数小时后(或用去污粉擦洗),重新清洗。 当前第37页\共有65页\编于星期二\6点 2、塑料用品洗涤 新的塑料器皿打开即用 已用过的塑料器皿 2%NaOH浸泡12h 清水冲洗 2%—5%盐酸浸泡30min 清水冲洗 蒸馏水冲洗 晾干备用 当前第38页\共有65页\编于星期二\6点 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤(新的可以用热洗衣粉水洗净),需要清洗时,一般用酒精擦洗,然后火焰干燥。 3、金属用品洗涤 当前第39页\共有65页\编于星期二\6点 (一)、灭菌工作是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴:有菌:凡是暴露在空气中的物体,至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面,未处理的工具和手等。 无菌:高压高温处理(工具、器皿、培养基等) 物理或化学处理; 火烤后的物体; 健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的(有时也有内生菌,但 不会影响培养,也不会污染) 五. 灭菌技术 当前第40页\共有65页\编于星期二\6点 1、物理方法:干热、湿热、过滤(0.25微米)紫外灯、超声波等。 2、化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。 五. 灭菌技术 当前第41页\共有65页\编于星期二\6点 干热灭菌 玻璃器皿、器械 湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 熏蒸灭菌 接种室、培养室 过滤灭菌 液体培养基、蒸馏水 药剂灭菌 培养材料 烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸 辐射灭菌 接种室、培养间 (一)各种灭菌方法及其使用范围 当前第42页\共有65页\编于星期二\6点 适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法:150℃ 、40min或120℃ 、120min,如果发现芽孢杆菌,160℃ 、90~120min (1)干热灭菌 当前第43页\共有65页\编于星期二\6点 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20~30min注意点:加足水、排尽气、气压降到0时,才能开盖。 (2)湿热灭菌 当前第44页\共有65页\编于星期二\6点 培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培养基中某些成分遇到高温分解(如某些生长调节剂GA3、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌。 灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,用注射器注入微孔滤膜虑,滤膜孔径0.22~0.45微米。制培养基时,现将培养基高压灭菌,待降至50℃左右时,加入适量的激素,然后分装。 (3)过滤灭菌 当前第45页\共有65页\编于星期二\6点 主要是利用紫外灯进行照射,适合实验室空气、操作台等,灭菌时间20~30min。注意:关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。 (4)射线灭菌 当前第46页\共有65页\编于星期二\6点 用火焰灼烧达到灭菌目的,适用于接种器皿的灭菌。 (5)火焰灼烧灭菌 当前第47页\共有65页
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