体外放射分析技术.ppt

体外放射分析技术 第一页，共三十五页，2022年，8月28日 体外分析发展史 第二页，共三十五页，2022年，8月28日 Yalow Berson 第三页，共三十五页，2022年，8月28日 一、定义 以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。 第四页，共三十五页，2022年，8月28日 二、分类: 体 外 分 析 技 术 体外放射分析 体外非放射分析 放射性竞争 结合分析 放射性非竞 争结合分析 放射免疫分析 (radioimmunoassay, RIA) 免疫放射分析 (immunoradiometric assay, IRMA) 酶免疫分析(EIA) 化学发光免疫分析 (CLIA) 荧光免疫分析(FIA) 第五页，共三十五页，2022年，8月28日 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 第六页，共三十五页，2022年，8月28日 一、RIA的基本原理 （一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 第七页，共三十五页，2022年，8月28日 分析原理 *Ag + Ab Ag + *Ag-Ab + *Ag Ag-Ab + Ag 条件： *Ag与Ag免疫活性相同 *Ag与Ab恒量 *Ag与Ag总量大于Ab有效结合位点 第八页，共三十五页，2022年，8月28日 第九页，共三十五页，2022年，8月28日 Ag*与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争性与Ab结合，当Ag*和Ab的量保持恒定，Ag*与Ag之和大于Ab时，则Ag*-Ab复合物的形成受Ag含量的制约，二者之间存在竟争抑制的函数关系，即随着Ag浓度的增加，Ag*-Ab复合物就减少，因为Ag*对Ab的结合被Ag竞争性抑制。根据这一函数关系的标准曲线，可求出被测抗原的含量 第十页，共三十五页，2022年，8月28日 （二）剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 第十一页，共三十五页，2022年，8月28日 标准曲线的绘制方法 用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应； 在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F； 分别测量B和F的放射性； 用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 第十二页，共三十五页，2022年，8月28日 标 准 曲 线 第十三页，共三十五页，2022年，8月28日 二、RIA的基本步骤： 实验由两部分组成： 1.标准曲线：用一系列浓度递增的标准品（oAg），在 严格相同的条件下同*Ag竞争与Ab结合反应，以oAg的 剂量为横坐标， *Ag.Ab结合率（B%）为纵坐标制得 刻度曲线（Calibration curve）； 2.样本测定：同等条件下，待测样本可获得一定的B%， 由此可从标准曲线上求得待测物（oAg）的含量。 第十四页，共三十五页，2022年，8月28日 三、质量控制(Quality Control): 目的：为了获得准确可靠的测定结果 室间：某一地区/全国性机构就一些分析项目 质控 对各实验室所得结果进行统计比较 室内：实验室内部对每次分析结果的质量进 行检查和控制 误差： A. 随机误差(Random Error)： 放射性测量的统计误差 不可避免，呈高斯分 实验操作的实验误差 布，以精密度评价 试剂配制等 B.系统误差(System