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4.沙门菌 试验组 培养基 加入 培养时间h 结果 供试品阳性对照 营养肉汤100ml 10ml供试液+ 50~100cfu沙门菌 18 ~24h,必要时延长至48h 下面试验 ? 供试品 10ml供试液 阴性对照 10ml稀释剂 无菌落生长 表6 沙门菌的检查(一) 2008年5月 * 当前第62页\共有74页\编于星期二\18点 菌的名称 试验名称 培养基 培养时间h 结果 沙 门 菌 1mL试液加入四硫酸钠亮绿培养基10mL中 划线接种胆盐乳酸琼脂和麦康凯琼脂 18~24 18~24 无菌或特征不符,判断未 检出 有菌生长或可疑菌做 三铁糖 2~3菌落接种三铁糖琼脂培养基、穿刺高层接种 18~24 斜面未见红色、底层未见黄色;或斜面黄色、底层无黑色。判未检出。 否则取三铁糖斜面培养物继续做下面试验及血清凝集试验。 靛基质试验 蛋白胨水培养基 24 靛基质数滴 阳性:液面玫瑰红色 阴性:试剂本色 表7 沙门菌的检查(二) 2008年5月 * 当前第63页\共有74页\编于星期二\18点 沙 门 菌 脲酶试验 尿素培养基 24 阳性:斜面变红色 阴性:不变色 氰化钾试验 各一环氰化钾培养基和对照培养基 24~48 对照管有菌生长,试验管有菌生长是阳性 赖氨酸脱羧酶试验 赖氨酸脱羧酶培养基和对照培养基 24~48 对照管应为黄色,试验管紫色为阳性,黄色为阴性 动力检查 穿刺半固体培养基 24 细菌沿穿刺外周扩散生长为动力阳性。阳性培养物在室温保存2~3d再观察 2008年5月 * 当前第64页\共有74页\编于星期二\18点 表9沙门菌菌落形态特征 培养基 菌落形态 胆盐硫乳琼脂 无色至浅橙色,半透明,菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。 沙门、志贺菌属琼脂 无色至淡红色,半透明或不透明,菌落中心有时带黑褐色。 曙红亚甲蓝琼脂 无色至浅橙色,透明或半透明,光滑湿润的圆形菌落。 麦康凯琼脂 无色至浅橙色,透明或半透明,菌落中心有时为暗色。 2008年5月 * 当前第65页\共有74页\编于星期二\18点 5.溶血型链球菌 增菌培养→血平板划线培养→观察→革兰氏染色→生化试验 具体检查方法见表: 10、11、12 2008年5月 * 当前第66页\共有74页\编于星期二\18点 表10溶血性链球菌的检查 试验组 培养基 加入 培养时间h 再培养 结果 供试品阳性对照 葡萄糖肉汤50ml 5ml供试液+ 50~100cfu溶链菌 18~24小时,必要时可延至 48小时 划线接种于血琼脂培养基培养24小时。 典型菌落生长 供试品 10ml供试液 ? 阴性对照 10ml稀释剂 无菌落生长 2008年5月 * 当前第67页\共有74页\编于星期二\18点 表11溶血性链球菌菌落形态特征 培养基 菌落形态 血琼脂平板 为灰白色,半透明或不透明,针尖状突起,表面光滑,边缘整齐,周围有无色透明溶血圈。 平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表10所列特征,判供试品未检出溶血性链球菌。 平板上生长的菌落与表10所列的菌落特征相符或疑似,应挑选2~3个菌落,分别接种于血琼脂营养培养基斜面上,培养18~24 小时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色,并接种于营养肉汤培养基中,培养18~24小时,生化试验。 2008年5月 * 当前第68页\共有74页\编于星期二\18点 表12结果判断 试验方法 观察 结果 革兰氏染色 显微镜下G+球菌呈链状排列 检出溶血性链球菌 血琼脂培养基 形态特征符合(表11) 链激酶试验 凝块溶化 杆菌肽 敏感试验 有抑菌圈 2008年5月 * 当前第69页\共有74页\编于星期二\18点 表13溶血性链球菌鉴定试验 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀,经离心沉淀,吸取上清液)加入0.8ml,灭菌生理盐水,混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml和0.25%氯化钙0.25ml混匀,放35±2 ℃水浴2min观察一次待血浆凝固后继续观察溶化时间。如2h内不溶化,继续放置24h观察,如凝块全部溶化为阳性,24h不溶化为阴性。 杆菌肽 敏感试验 将被检菌液涂于血平板上,用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上,同时以已知阳性菌株作对照,在35±2 ℃下放置18-24h,有抑菌圈为阳性。 2008年5月 * 当前第70页\共有74页\编于星期二\18点 微生物实验室常用仪器 仪器名称 使用重点 普通培养箱 隔水式培养箱注意水位 箱内部物品的摆放布置 箱内部温度的日常监控 电热恒温干燥箱 安
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