细胞培养正常组织细胞培养.pptx

;主要内容;主要内容;培养细胞的取材;培养细胞的取材;6;培养细胞的取材;培养细胞的取材;培养细胞的取材;主要内容;;组织材料的分离;组织材料的分离;组织材料的分离;组织材料的分离;组织材料的分离;主要内容;原代细胞培养;;原代细胞培养;原代细胞培养;原代细胞培养;原代细胞培养;主要内容;·表皮细胞 ?在人和动物体内，表皮细胞生长在胶原基质膜上，并从基质膜获取生长分化所需要的物质，因此体外培养培养需要使用某些基质、培养液及包括滋养层在内的一些添加物。;?无菌切取皮肤标本，用DBSS冲洗3～5遍。 ?将标本的上皮层面朝下放入干燥的培养皿中，加数滴PBS使之湿润，用弯剪尽可能除净皮下脂肪和结缔组织，将标本切成大约 1cmX2cm的小块。 ?用无Ca2+、Mg2+的PBS 冲洗标本至少3次，将标本放入胰蛋白酶溶液中或中性分散酶 II中，4℃放置15-48h，或37℃ 1-3h。;几种细胞培养方法举例;·滋养层细胞制备 ?在已形成单层的3T3细胞培养瓶中加入丝裂霉素，使3T3细胞不在分裂增殖，即可作为表皮细胞的黏附滋养细胞。 ·黏壁剂包被 ?用0.01%的胶原蛋白铺于培养瓶的底部，过夜，弃上清，40℃烘干，制成胶原蛋白黏附膜，紫外线照射2h消毒备用。;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;·以1～5X105个细胞的密度接种在适量DMEM或FAD培养液中，37℃培养1-3天，细胞贴 壁后，冲洗未贴壁细胞。 ·传代培养：0.05%-0.1%的EDTA孵育10- 30min，细胞变圆后，在用0.1%的胰蛋白酶和0.05%EDTA消化，吸管吹打是细胞完全脱壁。;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;几种细胞培养方法举例;·对于股骨中骨髓细胞的分离，则可以采取冲洗股骨腔的方法获得。;实验材料;小鼠的处死：颈椎脱位法 右手（左手）抓住鼠尾用力向后拉，同时左手 （右手）拇指与食指用力向下按住小鼠头部，在颅骨基部的后侧与颈椎两侧，施加压力，使头颅和脑一起与脊髓分离。当脊髓与脑分离时，伴有大量的肌肉活动。经研究???明，这种方法能使实验动物对痛觉不再敏感。;股骨骨髓细胞悬液的制备;主要内容;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系;建立细胞系