OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册.doc

Olympus FV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册 开关机步骤 开机步骤 1）打开计算机 2）打开汞灯电源开关 3）打开显微镜开关 4）打开载物台控制器开关 5）打开显微镜触屏面板开关 6）打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置） 7）打开激光器 = 1 \* GB3 ①405nm，633nm：打开开关键即可 = 2 \* GB3 ②559nm：先开开关键，绿色指示灯闪烁（约两分钟），停止闪烁后将钥匙顺时针拧到on位置（红灯闪烁，停止闪烁后即开启完成） = 3 \* GB3 ③多线氩离子（458nm，488nm，514nm）：先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置 8）双击电脑桌面上 打开 FV10-ASW 4.0应用软件。 关机步骤 1）关闭FV10-ASW 4.0应用软件 2）关闭激光器（注意: 多线氩离子458nm，488nm，514nm需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键） 3）关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键） 4）关闭显微镜触屏面板 5）关闭载物台控制器 6）关显微镜开关 7）关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方开关键 8）关计算机 显微镜观察 用触屏面板选择物镜； 点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，如下图： 紫外激发/蓝色光 蓝色激发/绿色荧光 绿色激发/红色荧光） 打开 ，显微镜目镜下观察样品，推动载物台控制手柄可水平方向移动样品，转动调焦旋钮可调节焦距； 获图 XY多通道扫描 镜下调好之后，点击软件中的按钮，关闭汞灯快门。 首先进行软件设置： 在Acquisition Setting里将扫描速度设置为8us/Pixel，像素数一般设置为1024*1024。 在Image Acquisition Control里点击Dye List按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料（注：再次双击已选项目可取消），然后点击Apply按钮。 将Image Acquisition Control面板中Filter Mode里Kalman 打钩选中，设置线平均Line 2次，这样可以降低图像的噪声。（ 见下图） 对于多通道扫描，将Image Acquisition Control里Sequential打钩，并选择面序列( Frame)方式,并将下方的激光通道按波长从大到小排序。 点击Focus x2按钮开始扫描，在选中的Channel里可先调节探测器的灵敏度（HV），一般控制在800V以内，然后调节Laser功率的百分比以调节激发光强度，过程中可微调焦距以获得更清晰的图像，如果图像的背景值略高，可调节Offset的数值去背景（控制在10%以内），点击Stop 按钮停止扫描。 每个通道都调好之后，勾选上全部通道，点击XY按钮获得一幅图像。 在拍完生成的2D-View Image文件里，点击左边工具栏图标添加标尺。 XYZ多层扫描 获取多层图像需要将Image Acquisition Control里Depth点上。 在预览时调节调焦旋钮，图像显示到达上限和下限时分别在Microscope面板里点Set Start End 设置多层扫描的范围。设置好之后输入Step Size大小（点击Op.按钮可以使用推荐的数值）并在Step Size前打钩。 点击XYZ按钮获得图像。扫描结束点击XYZ下方Series Done按钮成图。点击图像上方图标并选择图标进行3D图像的最大化叠加，鼠标右击此图，选择Save Display可直接保存此图。 XYT扫描 时间序列扫描可根据Acquisition Setting里每个Frame的时间 Frame 设置Timescan的参数，两次拍摄的时间间隔Interval要大于所有拍摄通道Frame时间之和，拍摄的总次数Num可以根据拍摄时长计算。设置好扫描时间间隔和扫描的次数后，点击 进行拍摄。拍摄结束点Series Done按钮成图。 图像的保存和导出 保存原始文件：点击主菜单File 下save as 存到选中的文件夹下（“Oib”类型是FV10-ASW软件专用图像格式） 导出TIFF文件：点击主菜单File 下Export弹出的面板里Merge Channel 打钩，Channel Selection里选中所要导出的通道，点Save保存。