中药化学实验指导.doc

- 中药化学实验指导书 目　　录 第一节　实验注意事项………………………………………………………01 第二节　试剂的使用…………………………………………………………04 第三节　实验部分……………………………………………………………06 实验一 层析练习………………………………………………………06 实验二 大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识…………………………10 实验三 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定………………13 实验四 芦丁的提取和鉴定……………………………………………15 实验五 葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定……………………20 实验六 茴香醚的提取分离和检识……………………………………23 实验七 三七总皂甙的提取和精制……………………………………25 实验八 薯蓣皂甙元的提取分离与鉴定………………………………27 实验九 盐酸小檗碱的提取、精制及检识　……………………………30 实验十 掌叶防已碱的提取分离及延胡索乙素的制备　……………34 实验十一 苦参生物碱的提取、分离与鉴定　……………………………39 实验十二 中药化学成分的系统预试验…………………………………43 附录……………………………………………………………………………53 实验部分 实验一　层析练习 层析法又称色谱法，色层法或层离法。它是近几十年迅速发展起来的一种分离方法，具有设备简单、分离效果好、快速等优点，在许多领域中都得到广泛应用。我们在对中草药进行分析研究时，层析法越来越成为必不可少的、基本的研究手段，因此我们必须熟练地掌握层析法。 层析法按操作形式的不同可分为：薄层层析（TLC），纸层析（PC）和柱层析（CC）。 一、常用薄层板的制备 （一）实验原理 羧甲基纤维素钠( CMC—Na)和石膏(Gypsum,简称 G )均为制备层析板常用之粘合剂，前者为一大分子有机化合物，可溶于水，借助其分子间的作用力而起到粘结作用，使吸附剂在一玻璃片上成一坚固的薄层。后者则是利用熟石膏吸水后凝固的性质而使吸附剂粘结为一均匀、结实的薄层。 （二）实验内容 1、硅胶－羧甲基纤维素钠（CMC-Na）粘合板的制备：称取 CMC－Na 0.8 克,溶于 100 毫升蒸馏水中,加热并充分搅拌至全溶。取上述溶液 37 毫升置研钵中,加入薄层层析用硅胶（200 目以上）15 克，研磨成匀浆，用药勺取一定量倒在薄板上并涂布均匀，然后轻轻振动，使薄层面平整均匀，平放，待阴干后，于烘箱中 110℃烘半小时，进行活化，活化后的薄层置干燥器中备用。 2、硅胶 G 粘合板的制备：称取硅胶G 5 克，加蒸馏水 15 毫升，研磨均匀后，取三分之一倾注在予先洗净晾干的玻璃板上，迅速振动玻璃板，使吸附剂薄层均匀平整，阴干后同上活化备用。注意：操作要迅速，以免因石膏吸水凝固而影响薄层的均匀性。 3、硅胶的活度测定： 3.1硅胶活度的测定：一般选用三种染料以薄层层析法进行。染料试样配方：二甲基黄、苏丹红、靛酚蓝各取40mg混溶于100ml苯中即可。　操作：将上述混合液点于待测的硅胶G或硅胶CMC－Nａ薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20mins），三种染料应明显分离。如果靛酚蓝的色斑接近于起始线，二甲基黄的色斑位于薄层的中间，苏丹红的色斑在靛酚蓝与二甲基黄的色斑之间，则可认为薄层板的活性符合通常使用的薄层要求。 3.2 硅胶活度的毛细管测定法：操作：取1.0×75cm毛细管一支，将毛细管一端灼烧加热封闭。取1个用于试剂瓶的滴帽，使吸附剂进入毛细管内，除去滴帽即可，（或采用测熔点法加入吸附剂）。再用吸管吸1滴苯在毛细管开口端（其目的是为了防止吸附剂从毛细管中掉下），切去毛细管的封闭端，从已被苯浸润的一端蘸取微量的0.5%的染料苯溶液。然后将毛细管放入盛有几毫升苯的容器中，展开，计算Rｆ值，从下表中查出吸附剂的活度级别。 硅胶活度与Rf值的关系 吸附剂 含水量% Rf值 级别 硅胶 0 0.15 = 1 \* ROMAN I 3 0.22 6 0.33 9 0.44 12 0.55 = 1 \* ROMAN I 15 0.65 = 2 \* ROMAN II 二、纸层析练习 （—）实验原理 纸层祈又叫分配纸层析（PC），是利用滤纸本身吸附的水分作固定相，所选用的展开剂作为流动相，根据不同极性化合物在该两相中的分配系数不同，随着展开剂的不断移动，而将各化合物分离开。 （二）实验内容 1、点样：取 15×3 厘米中速新华滤纸一张，在距一端 2 厘米处用铅笔轻轻划一横线，作为起始线，在间隔 1 厘米处分别点上以下样品： ① 1%D－葡萄糖水液 ② 1%L－鼠李糖水液 。 展开剂：正丁醇—醋酸—水（4:1:5，上层） 显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂喷后于105—1