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医学免疫学实验免疫标记技术;免疫标记技术;★免疫印迹技术(western blot);直接免疫荧光
荧光素直接标记抗体, 检测抗原。;显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
Fluorochrome
间接法indirect ELISA
显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
定性、定量、定位。
间接ELISA法检测血清抗-HBsAb
TMB/OPD + H2O2
间接法indirect ELISA
抗人IgM 或 IgG Fc段抗体
显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
(工业化生产)已知抗原:乙肝表面抗原(HBsAg),
荧光素直接标记抗体, 检测抗原。
一抗与标本中抗原结合,再用荧光素标记的二抗进展检测。
第5孔,待检血清2,加待检血清1滴
(不洗,因为二抗过量)
空白 阴性 阳性 待测1 待测2
Labeled Anti-Ig
免疫印迹〔Western blotting〕:“定性〞、“模拟定量〞;
概念:用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原
四甲基联苯胺(TMB); 人工制备抗体的类型;单克隆抗体〔mAb)
K?hler 和 Milstein 1975年建立的技术,通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体。;*;免疫荧光技术;定位:;共定位:;免疫荧光可“定位〞 、“定性〞 ,借助图像软件可进展模拟“定量〞分析;;酶标记技术;酶联免疫吸附试验Enzyme-Linked Immunosorbent Assays (ELISA)
用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。
Fluorochrome
四甲基联苯胺(TMB)
洗板:弃去孔内液体,注满洗涤液,静置5sec甩干,重复3次。
空白 阴性 阳性 待测1 待测2
一抗与标本中抗原结合,再用荧光素标记的二抗进展检测。
木瓜/胃蛋白酶
抗体Fc段(为抗原)
人蛋白:1,2,3 ……
K?hler 和 Milstein 1975年建立的技术,通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体。
显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
TMB/OPD + H2O2
Labeled Anti-Ig
★免疫印迹技术(western blot)
第3孔,阳性对照,加阳性对照血清1滴
异硫氰酸荧光素(FITC):黄绿色
酶联免疫吸附试验Enzyme-Linked Immunosorbent Assays (ELISA)
加酶结合物 (酶结合二抗);双抗体夹心法Sandwich ELISA;间接法indirect ELISA;医学免疫学实验免疫标记技术;免疫标记技术;★免疫印迹技术(western blot);直接免疫荧光
荧光素直接标记抗体, 检测抗原。;显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
Fluorochrome
间接法indirect ELISA
显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
定性、定量、定位。
间接ELISA法检测血清抗-HBsAb
TMB/OPD + H2O2
间接法indirect ELISA
抗人IgM 或 IgG Fc段抗体
显色:每孔加显色液A、B各1滴,混匀,封板,37 ?C ,15min
(工业化生产)已知抗原:乙肝表面抗原(HBsAg),
荧光素直接标记抗体, 检测抗原。
一抗与标本中抗原结合,再用荧光素标记的二抗进展检测。
第5孔,待检血清2,加待检血清1滴
(不洗,因为二抗过量)
空白 阴性 阳性 待测1 待测2
Labeled Anti-Ig
免疫印迹〔Western blotting〕:“定性〞、“模拟定量〞;
概念:用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原
四甲基联苯胺(TMB); 人工制备抗体的类型;单克隆抗体〔mAb)
K?hler 和 Milstein 1975年建立的技术,通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体。;*;免疫荧光技术;定位:;共定位:;免疫荧光可“定位〞 、“定性〞 ,借助图像软件可进展模拟“定量〞分析;;酶标记技术;酶联免疫吸附试验Enzyme-Linked Immunosorbent Assays (ELISA)
用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。
Fluorochrome
四甲基联苯胺(TMB)
洗板:弃去孔内液体,注满洗涤液,静置5sec甩干,重复3次。
空白 阴性 阳性 待测1 待测2
一抗与标本中抗原结合,再用荧光素标记的二抗进展检测
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