超高效液相色谱法测定同鸡白凤丸中芍药苷的含量.docxVIP

超高效液相色谱法测定同鸡白凤丸中芍药苷的含量 同治乌凤丸由乌江、地黄、白芍、当归、黄等19种中药组成。具有益气健血、调经停经的功效。用于气血两虚、身体瘦弱、腰膝软、月经不调、崩泻带等疾病。目前市售乌鸡白凤丸类产品主要分为药典方和北方方(清宫秘方)2种,其商品名分别为乌鸡白凤丸和同仁乌鸡白凤丸,两者处方略有不同。同仁乌鸡白凤丸(北方方)是北京同仁堂股份有限公司北京同仁堂制药厂独家生产的国家必威体育官网网址品种,为卫生部药品标准所收载。 中药的质量控制一直是中药现代化的一项重要内容,国家和地方多次立项进行这方面的研究,取得了良好的成果,对中药的质量提高起到了积极的推进作用,同仁乌鸡白凤丸正是在这一背景下由北京市科委立项(课题号:D0205004040721)进行研究的,课题组前期做了大量工作,本文在已有工作的基础上就超高效液相色谱在乌鸡白凤丸质量控制中的应用进行研究,对原有HPLC色谱条件有所优化,大大缩短了分析时间。笔者以期把这项技术应用到乌鸡白凤丸质量控制中,提高分析效率,保证产品质量。 1 药品与纺丝剂苯氧基的苯丙氨酸酯对照品羟基苷 Waters Acquity UPLCTM超高效液相色谱仪:二极管阵列检测器(PDA),工作站为Empower 2。对照品芍药苷由中国药品生物制品检定所提供。试验所用甲醇为色谱纯,其他溶剂均为分析纯,水为纯净水,过Millipore 0.22 μm 滤膜。同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)由北京同仁堂股份有限公司北京同仁堂制药厂提供。 2 方法和结果 2.1 s18柱流动相及检测波长 色谱柱:Waters ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm);流动相:甲醇-水(20∶80);流速:0.4 mL·min-1;检测波长:232 nm;柱温:35 ℃;进样量:2 μL。 2.2 u3000溶液 精密称芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.06 mg的溶液;精密吸取此溶液2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得每1 mL含0.012 mg的溶液。 2.3 超声处理法 取同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸),研细,精密称取1 g,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声处理(功率300 W,频率50 kHz)30 min,放冷,再称重,补足减失重量,滤过,取续滤液2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。 2.4 对照品溶液的配制 精密称取芍药苷对照品6.20 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成每1 mL含0.12 mg的对照品储备溶液。精密吸取对照品储备溶液0.4,0.8,1,2,4 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密吸取2 μL注入超高效液相色谱仪,以芍药苷进样量X(ng)为横坐标,对相应峰面积Y为纵坐标进行线性回归处理,得回归方程为: Y=-2.06×104+7.55×106X r=0.9999 结果表明,芍药苷进样量在9.92～99.2 ng范围内线性关系良好。 2.5 精密度测试 精密吸取0.012 mg·mL-1对照品溶液2 μL,连续进样6次,芍药苷峰面积的RSD为0.25%。表明仪器精密度良好。 2.6 制备工艺的测定 取同一批次的样品10份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定芍药苷的含量,其平均值为0.0662%,RSD为1.9%。结果表明,本方法的重复性符合要求,适合于同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)中芍药苷的提取和UPLC分析。 2.7 进样稳定性试验 取同一供试品溶液分别在0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24 h进样,按上述色谱条件测定峰面积,计算RSD为1.5%,结果表明,供试品溶液在24 h内稳定。 2.8 加样回收率试验 精密称取已知芍药苷含量(0.0662%)的同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)粉末约0.5 g,共6份,分别精密加入1.284 mg·mL-1芍药苷对照品溶液0.1 mL,按“2.3”项下方法制备供试溶液并测定,计算回收率。结果平均回收率(n=6)为102.0%,RSD为2.0%。 2.9 热相色谱法测定 取10批同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)按“2.3”项下方法制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液和对照品溶液(0.012 mg·mL-1)各2 μL,注入超高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录峰面积,按外标法计算含量,结果见表1。同时采用HPLC法测定上述10批次的样品,结果(见表1)表明,UPLC法和HPLC法所测得的同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)中芍药苷含量测定结果一致。色谱图见图1。 3 讨论 3.1 对照品溶液及供试品溶液 以文献法的对照品溶液及供试品溶液浓度为基础,在UPLC仪上考察了不同浓度的对照品溶液及供试品溶液,发现将HPLC法的