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螺旋藻藻蓝蛋白制备技术规范 1 范围 本文件规定了螺旋藻藻蓝蛋白制备过程中细胞破壁、固液分离、超滤浓缩、干燥等制备技术及 相关要求。 本文件适用于从螺旋藻中制备食品级藻蓝蛋白粉剂的过程。 2 规范性引用文件 下列文件中通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB 1886.309 食品安全国家标准 食品添加剂 藻蓝蛋白 GB 5009.3 食品中水分的测定 GB 5009.11 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品中铅的测定 GB 5009.17 食品中总汞及有机汞的测定 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 16919 食用螺旋藻粉 GB 25564 食品安全国家标准 食品添加剂 磷酸二氢钠 GB 25568 食品安全国家标准 食品添加剂 磷酸氢二钠 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 螺旋藻藻蓝蛋白（Phycocyanin from Spirulina ）：以淡水或海水养殖的螺旋藻（Spirulina ）为原 材料，经水抽提、纯化等工艺制得的一种亮蓝色蛋白。 4 材料原辅料及仪器设备 4.1 螺旋藻粉 应符合GB 16919 的有关规定；藻泥是指经过离心收集得到的未经干燥、具有较高含水量的湿螺 旋藻。 4.2 磷酸盐缓冲液 应符合GB 25564和GB 25568 的有关规定，详见附录A 。 4.3 滤膜 - 1 - 材料为醋酸纤维或硝化纤维的滤膜，其中粗略要求孔径0.45 μm，超滤要求膜截留分子量介于5 kDa~10 kDa 。 4.4 离心机 可以使用平板式离心机、三足式离心机、卧式离心机、管式离心机和碟式离心机等，要求离心 力4000 g~6000 g ，离心温度不超过20℃，离心后上清液无肉眼可见的杂质，能够去除固体残渣。 4.5 分光光度计 波长范围190 nm~1100 nm可调。 4.6 喷雾干燥机 进风温度为190±10℃，出风温度为80±5℃。 5 制备过程 5.1 制备流程 藻蓝蛋白制备流程图详见附录B 。 5.2 破壁 5.2.1 原理 将螺旋藻粉或藻泥经过冻融、酶解、溶胀、化学、机械研磨等方法或其组合，使螺旋藻细胞破 裂，将藻蓝蛋白释放至磷酸盐缓冲液中。 5.2.2 冻融法破壁 用蒸馏水制冰，再进一步破碎至20 目~40 目（约425 μm~800 μm ）制成冰粉。准确称取螺旋藻粉， 按照藻粉或藻泥与冰粉质量比为1:10~1:20 的比例加入-10℃的冰粉。将上述的螺旋藻藻粉或藻泥和 冰粉混合物置于搅拌罐内，在800 rpm~1200 rpm的搅拌速度下，并保持罐体温度在0℃以下，破壁处 理80 min~120 min。破壁处理结束后，等冰粉自然融化，得到含有藻蓝蛋白粗提液的破壁液。 5.2.3 机械破壁 准确称取螺旋藻粉或藻泥，按10%~15% （质量体积比）比例加入4 ℃，0.01 M的磷酸盐缓冲液（pH 6.8 ）中，在混合颗粒机中充分混匀。然后用5 目尼龙网摇摆颗粒机制成螺旋藻湿粒，再经胶体磨循 环研磨，充分粉碎。 5.2.4 压力破壁 - 2 - 加压破碎：准确称取螺旋藻粉或藻泥，按10%~15% （质量体积比）比例加入4 ℃，0.01 M的磷酸 盐缓冲液（pH 6.8 ），充分混匀，在4 ℃，压力为40 MPa~70 MPa条件下进行高压匀质破壁2~5次，得 到螺旋藻破壁液。 减压破碎：准确称取螺旋藻粉或藻泥，按10%~15% （质量体积比）比例加入4 ℃，0.01 M的磷酸 盐缓冲液（pH 6.8 ），充分混匀，从压力40 MPa ~70 MPa ，稳步减压至0.1 MPa，搅拌破壁1 h，得到 螺旋藻破壁液。 5.2.5 酶解破壁 准确称取螺旋藻粉或藻泥，按照藻:水为1:2~1:3 （质量比）比例用蒸馏水浸泡，可加入适量抑菌 剂，室温下避光搅拌过夜。按照酶溶液:藻为1.0~1.5:100 （质量比）加入1.5% （质量体积比）的纤维