第十一章克隆与医学演示文稿.pptVIP

(1)供体细胞的准备 用于细胞核移植的供体(donor)细胞有：早期胚胎细胞、胚胎干细胞和体细胞，它们可来自活体或体外培养的细胞。 供体核处在GO/G1期：容易获得最佳克隆效果。这时的细胞虽然代谢比较活跃，但细胞却置身于细胞分裂周期之外； 供体核处在Ｓ/G２期：受体卵母细胞质指导的潜在的基因组复制将导致异常的发育。　 本文档共65页；当前第31页；编辑于星期二\20点45分 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 本文档共65页；当前第32页；编辑于星期二\20点45分 (2)受体细胞的准备 核移植的受体(recipient)细胞有：去核卵细胞、受精卵和2细胞胚胎，其中多以卵细胞作为受体。卵细胞一般采用超排卵法或卵巢的卵泡，经体外培养成熟而获得。将收集到的受体细胞经显微操作或其他方式去除细胞核。 供体细胞与受体细胞的细胞周期同步化。 本文档共65页；当前第33页；编辑于星期二\20点45分 卵母细胞的去核： 本文档共65页；当前第34页；编辑于星期二\20点45分 (3)核移植 利用显微操作技术，将供体核移入去核受体细胞质形成重构胚。 卵子的激活：在正常受精过程中，精子穿过透明带及卵黄膜时，引起卵子内钙离子浓度升高，卵子细胞周期恢复，启动胚胎发育，这一现象称为激活。胚胎克隆时，通常用一定强度的电脉冲作用卵母细胞。 本文档共65页；当前第35页；编辑于星期二\20点45分 (4)重构胚的培养及移植 完成核移植后形成的单个细胞在体外培养一段时间，或者是移入离体输卵管（同种或异种）进行体外培养，待获得发育的重构胚（囊胚或桑椹胚）后再移入雌性子宫或输卵管进行发育，直到出生。 通过核移植得到的胚胎可作供体，再进行细胞核移植，称再克隆。 本文档共65页；当前第36页；编辑于星期二\20点45分 ．体细胞与去核卵细胞融合技术 供体细胞不一定是核，可以是含部分细胞质甚至是整个细胞 不进行核移植，而是用细胞融合技术，使供核细胞与去核卵细胞融合获得重构胚 融合方法有：电融合、化学融合、病毒融合等。 本文档共65页；当前第37页；编辑于星期二\20点45分 2.2．治疗性克隆技术 克隆与医学 治疗性克隆技术是克隆技术、胚胎干细胞技术、移植技术结合的一种综合技术。 Somatic cell nuclear transfer direct differentiation Replace therapy Establish of ES cells 本文档共65页；当前第38页；编辑于星期二\20点45分 2.2．治疗性克隆技术 取患者体细胞，体外培养，使细胞同步化 显微注射移入去核卵母细胞构建重构胚 体外培养至囊胚分离细胞团，获得胚胎干细胞 对胚胎干细胞进行基因修饰，定向诱导分化 移植入患者病变部位，替代病损细胞、组织 器官，达到治疗的效果 本文档共65页；当前第39页；编辑于星期二\20点45分 人的治疗性克隆（左）和生殖性克隆（右） 本文档共65页；当前第40页；编辑于星期二\20点45分 第三节 动物克隆技术的应用前景 本文档共65页；当前第41页；编辑于星期二\20点45分 3.1．动物克隆技术与医学 克隆与医学 (1)克隆技术与医药生产 结合转基因技术制备动物生物反应器 (2)克隆技术结合转基因技术构建疾病动物模型 (3)克隆技术与组织工程 (4)动物克隆技术与与基因疗法结合治疗遗传疾病 本文档共65页；当前第42页；编辑于星期二\20点45分 (1)克隆技术与医药生产 克隆与医学 ★将转基因技术与克隆技术有机结合，以动物体细胞为受体，将药用蛋白基因以DNA转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞内，再以这些携带目的基因的体细胞为核供体，进行动物克隆。 ★应用克隆技术还可构建疾病动物模型，以研究疾病的发病机制、治疗方案和防治措施。也可应用体细胞克隆技术和干细胞技术研究疾病基因组、功能基因组、以及基因的功能。 本文档共65页；当前第43页；编辑于星期二\20点45分 (2)克隆技术与组织工程 克隆与医学 ★组织工程(tissue engineering)是近年来发展起来的一门新兴交叉学科，它是应用工程学和生命科学的原理和方法，创建组织和器官或替代物，植入体内，修复组织缺损，替代损伤的组织、器官，达到提高生活、生存质量，延长生命的目的。 ★利用治疗性克隆技术获得组织工程所需的胚胎干细胞可用于培育各种组织、器官进行移植；也可接种于由生物可吸收材料构成的三维结构中，经过适当培养，形成具有一定组织结构的移植物，移植于受损伤部位，细胞继续分裂、分化、重组成新组织，避免排斥反应。 本文档共65页；当前第44页；编辑于星期二\20点45分 人耳鼠”是先使用可降解材料经过耳形