HCoV-NL63 N蛋白不同片段的原核表达纯化及血清学检测应用分析的中期报告.docx

HCoV-NL63 N蛋白不同片段的原核表达纯化及血清学检测应用分析的中期报告 本实验的中期报告主要介绍了对HCoV-NL63 N蛋白不同片段的原核表达纯化和血清学检测的应用分析。 首先，我们设计了两种不同的HCoV-NL63 N蛋白片段，分别为N1和N2。通过PCR扩增得到了目标片段的DNA序列，并进行过适当的酶切和连接处理，并插入到pET32a(+)载体中，得到重组质粒pET32a-N1和pET32a-N2。 接下来，我们将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，进行原核表达。经过SDS和Western blotting的检测，证实表达和表达纯度都较高。针对表达蛋白进行蛋白质纯化，我们采用了亲和层析法，经过了一系列的洗脱和再结晶等处理，得到了表达纯度较高的HCoV-NL63 N1和N2蛋白。 最后，我们进行了HCoV-NL63 N1和N2蛋白的血清学检测。对多个新冠病毒感染患者的血清进行ELISA检测，测试结果表明HCoV-NL63 N蛋白在新冠病毒的感染过程中存在交叉反应。这为提高新冠病毒检测方法的准确性和敏感性提供了一定的实验依据。 综合来看，本实验中期报告完成了对HCoV-NL63 N蛋白不同片段的原核表达纯化和HCoV-NL63 N蛋白的血清学检测，为今后深入研究提供了基础。