DB22_T 3567-2023 肿瘤基因突变检测——高通量测序技术规范.docxVIP

ICS?11.020 CCS?C?05 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB?22/T?3567—2023 肿瘤基因突变检测——高通量测序技术规 范 Technical?regulation?of?next-generation?gene?sequencing?for?tumor?gene?mutation detection 2023?-?09?-?28?发布 2023?-?11?-?16?实施 吉林省市场监督管理厅 发?布 DB22/T?3567—2023 前 言 本文件按照GB/T?1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由吉林省卫生健康委员会提出并归口。 本文件起草单位：吉林大学。 本文件主要起草人：姜艳芳、胡欣彤、何佳雪、陈立国、王多、李昂、张鹏、刘勇。 I DB22/T?3567—2023 肿瘤基因突变检测——高通量测序技术规范 1??范围 本文件规定了肿瘤基因突变检测-高通量测序检测技术的生物安全要求、材料与试剂、样本、测序 流程、质量控制和废弃物处理。 本文件适用于肿瘤基因突变检测的高通量测序检测。 2??规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB?19489 实验室生物安全通用要求 GB/T?30989 高通量基因测序技术规程 SN/T?1193 基因检验实验室技术要求 YY/T?1723 高通量基因测序仪 3??术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4??生物安全要求 4.1??采样及检测过程所涉及的实验操作应按?GB?19489、GB/T?30989、SN/T?1193?规定执行。 4.2??为保证生物安全，检测应在指定的区域内进行。区域分区可分为：试剂准备区、样本制备区、打 断区、文库制备区、扩增一区、杂交捕获区、扩增二区、测序区等，见图?1。 图1 5??材料与试剂 5.1??仪器与耗材 1 病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，FFPE??样本的组织面积应介于?0.5??cm 病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，FFPE??样本的组织面积应介于?0.5??cm?～1??cm?，切片用 5.1.1??微量移液器：10?μL、100?μL、200?μL、1000?μL?。 5.1.2??微量带滤芯吸头：10?μL、100?μL、200?μL、1000?μL。 5.1.3??实时荧光定量?PCR?仪。 5.1.4??离心管：200?μL、1.5?mL、2?mL、10?mL、15?mL。 5.1.5??高通量测序仪：高通量测序仪质量应符合?YY/T?1723?的要求。 5.1.6??生物分析仪。 5.1.7??微量核酸定量仪：可检测低至?10?pg/μL?的?DNA。 5.1.8??微量分光光度计和荧光分光光度计。 5.1.9??基因扩增仪。 5.2??试剂 5.2.1??试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合?GB/T?6682?规定的二级水，所用化学试剂均为 分析纯。 5.2.2??核酸提取试剂。 5.2.3??荧光?PCR?试剂。 5.2.4??RNase?A。 5.2.5??测序反应通用试剂盒。 6??样本 6.1??采集、保存及质量要求 6.1.1??手术组织样本：在显微镜下确认肿瘤细胞所占比例应≥30%，坏死细胞所占比例应≤10?%，相关 的病理检测结果保存备查。新鲜组织样本在含福尔马林或?DNA/RNA?保存液保存，常温下可保存?1?个月。 冻存样本需在样本采集后立即放入液氮完全冷冻，-80?℃低温保存，干冰运输。 6.1.2??石蜡组织/切片组织：10%中性福尔马林固定手术标本，按病理学操作规范进行取材。石蜡包埋 2 2 量为?5?片～10?片，厚度为?5?μm～10?μm，用载玻片片盒或者离心管保存，常温保存、运输。活检材料 的固定时间一般是?24?h?以内。 6.1.3??外周血：采集外周血提取血浆游离?DNA?进行检测，使用血浆游离?DNA?专用采血管采集外周血?10 mL，在常温条件下，ctDNA?在全血中可稳定保存?7?d。 6.1.4??体液：体液中的肿瘤细胞用于基因检测时，需确认肿瘤细胞，穿刺获得胸腹水样本提交给细胞 病理检查之后，剩余液体冷藏/冷冻保存，或在含有细胞成分的离心沉淀中加入含有蛋白质变性剂的缓 冲液室温保存。体液中的?ctDNA?用于基因检测时，使用血浆游离?DNA?专用采血管采集新鲜体液?10