HIV快速检测实验室.docx

HIV 初筛实验室操作规范 (一) 一 、抽 血 标 准 操 作 规 程 1、 适 用 范 围 需做血液检测的对象。 2、 试 剂 与 材 料 碘酒、酒精棉、棉签、橡皮止血带、注射器 (一次性采血器)、试管、止血棉。 3、 操 作 步 骤 3.1 核对被检者姓名并标价试管； 3.2 请被检者入座，伸出手臂放在采血垫上； 3.3 用橡皮止血带扎紧并请被检者握紧拳头； 3.4选择静脉，用碘酒棉在采血部位由里向外擦拭(直径约6cm 左右)消毒； 3.5 用酒精棉脱碘； 3.6 把一次性注射器(一次性采血器)打开，在采血部位穿刺静脉，抽取血液； 3.7 放松橡皮止血带，拔出针头，同时请被检者用止血棉压迫止血。 二、 酒 精 棉 球 的 制 备 1. 试剂与材料 无水乙醇(分析纯) 、 消毒蒸馏水若干、消毒量筒(1000ml) 、消毒盛器 2. 操作步骤 2.1 把消毒棉放入消毒盛器中待用。 2.2 取165ml 消毒蒸馏水到入消毒好的量筒中，再加入一瓶500ml无水乙醇充分混匀。 2.3 把配好的75%酒精到入放有消毒棉的盛器中 三、样品的采集和处理 1. 范围 本章规定了用于艾滋病病毒 (HIV) 检测的血清、浆和全血样品的采集和处理方法， 适用于HIV 抗体检测、抗原检测、核酸检测、 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定和 HIV 分离培 养。 2. 操作步骤 2.1 样品的采集和处理 艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为 测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下： 2.1.1 血清样品采集和处理 用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血，室温下自然放置1~2小时， 待血液凝固、血块收缩后再用3、000r/min 离心15min, 吸出血请备用。 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤，迅速把 滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装 送检。 2.1.2 抗凝血样品采集和处理 用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽去静脉血，转移至加有抗凝剂的 试管),反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定可选用 K3EDTA 或肝素或柠檬酸钠， HIV 病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA 或枸橼 酸钠。 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4~8h 内分离 PBMC 和血浆，否则应 在24~48h内分离血浆和血细胞。(病毒载量测定不同方法对样品的要求见第四章4.1 中表 2;CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定样品采集要求见第五章4.1。) 2.1.3 采集样品注意事项 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作(试剂盒有特殊要求)。 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液； 直接接触HIV 感染者/艾滋病 (AIDS) 病人血液/体液的操作，应带双层手套。 2.2 样品的保存 2.2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20度以下，短期(1 周)内进行检测 的样品可存放于2-8度。 2.2.2用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20以下，进行病毒RNA 检测的 样品如需保存3个月以上应置于-80度。 2.2.3 用于 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h 则 不可检测。 2.3 样品的运送 2.3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 2.3.2应采用WHO 提出的三级包装系统 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显 的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸 水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第 一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴 标签(数量，收、发件人)。 2.3.3 血清和血浆样品应在2~8度条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定 的样品应在室温下18~23度运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。 2.3.4运送感染性材料必须有记录。 2.3.5 如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20度以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免 冻融。 2.3.6特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包 装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。 2.4