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石榴组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了石榴组培快繁中培养基制备与灭菌、母株选择、外植体采集与灭菌、初代培养、增殖 培养、生根培养、驯化移栽、质量要求、包装运输和档案管理等技术要求。 本文件适用于石榴组织培养快速繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 2289 林木种苗生产经营档案 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 培养基制备与灭菌 4.1 培养基制备 培养基制备方法见表 1。 表1 培养基制备方法 培养基类型 配方 初代培养基 1.5 mg/L 6-BA、0.3 mg/L IBA、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的MS 培养基 0.3 mg/L NAA、100 ml/L～200 ml/L 椰汁、0.5 mg/L～1.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L GA 、6 g/L 3 增殖培养基 琼脂、30 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的MS 培养基，或100 ml/L 椰汁、0.6 mg/L 6-BA、0.5 mg/L IBA、0.2 mg/L GA 、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的B5 培养基 3 1.0 mg/L IBA、100 ml/L 椰汁、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖的B5 培养基，或0.6 mg/L IBA、0.1 生根培养基 mg/L NAA 、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖的 1/2 MS 培养基，或0.6 mg/L IBA 、0.8g/L 活性炭、6 g/L 琼脂、20 g/L 蔗糖的WPM 培养基 4.2 培养基灭菌 配好的培养基pH值调整为5.8～6.0，分装在玻璃组培瓶或三角瓶中，宜采用高压蒸汽法灭菌。 5 母株选择 选择适合当地气候条件、生长旺盛、无病虫害、优良性状典型的健壮植株作为外植体采集母株。 1 6 外植体采集与灭菌 6.1 外植体采集 6.1.1 采集外植体时选择连续3 d 以上的晴天。 6.1.2 4 月～6 月，采集生长健壮、无病虫害的当年生枝条顶端带芽茎段作为外植体。 6.1.3 11月～翌年3月，采集成年植株一年生休眠枝条，插入装有清水的容器中，容器置于室温18 ℃～ 25 ℃下培养，待芽萌发抽枝长至2～5 个节时，取其带芽茎段作为外植体材料。 6.2 外植体灭菌 采集外植体材料后，去掉2/3叶片，剪成1.5 cm～2 cm左右的单腋芽茎段，用洗洁精稀溶液浸泡， 振荡洗涤10 min，自来水冲洗干净后，置于超净工作台上灭菌。75%酒精表面杀菌30 s，无菌水冲洗3 遍，5% NaClO溶液浸泡振荡8 min，无菌水冲洗5遍。 7 初代培养 将灭菌后的茎段置于4 ‰～6 ‰ PVP溶液中浸泡10 min取出，用无菌滤纸吸干表面水分，剪去两端 变色部分2 mm～3 mm，然后形态学下端朝下接种于初代培养基中。在超净工作台中接种，每瓶接种3个～ 4个单腋芽茎段。将接种后的单腋芽茎段置于温度(24±1) ℃，光照强度1 500 lx～2 000 lx，光照时 间14 h/d～16 h/d的条件下培养。 8 增殖培养 经初代培养诱导出的腋芽长至2 cm～3 cm 时，切去基部后，将剩余茎段转入增殖培养基中。灭菌 前建议添加PPM抗菌剂，减少增殖苗污染。每瓶接种3个～4个单腋芽茎段。加入GA 防止玻璃化，加入椰