发育生物学发育生物学研究技术.pptVIP

从自然或人工突变体中分离鉴定控制发育的基因 自然群体中的突变体； 化学诱变剂处理，如亚硝基－乙脲－乙亚硝基脲 (N-nitroso-N-ethylurea ethylnitrosourea, ENU)； 外源DNA插入法，如DNA注射、病毒感染、转座子利用等； X－射线或 r－射线照射 获得突变体的方法 本文档共48页；当前第31页；编辑于星期三\3点3分 自发突变 (spontaneous mutation) Recessive mutation (纯合体状态) /Dominant (杂合体状态) /semi-dominant 本文档共48页；当前第32页；编辑于星期三\3点3分 自发突变 (spontaneouse mutation) semi-dominant mutation (半显性突变) 本文档共48页；当前第33页；编辑于星期三\3点3分 斑马鱼上ENU化学突变研究的成就(1996) 从自然或人工突变体中分离鉴定控制发育的基因 化学诱变法 本文档共48页；当前第34页；编辑于星期三\3点3分 Developmental Biology - Spring 2007 Slide * 发育生物学研究技术 本文档共48页；当前第1页；编辑于星期三\3点3分 常用发育生物学研究技术简介 显微镜技术 (成像imaging); 组织切片技术 (经典解剖形态学morphology); 生化分子生物学; 原位杂交技术 (in situ hybridization); 显微注射; 报告基因技术; 细胞标记技术; 本文档共48页；当前第2页；编辑于星期三\3点3分 显微镜技术 目的：观察胚胎个体 分类： 光学(optical)显微镜: 体视显微镜: 组织分离用 荧光显微镜： 本文档共48页；当前第3页；编辑于星期三\3点3分 显微镜技术 激光共聚焦显微镜 (laser confocal)：荧光标记，对胚胎或细胞中的特定蛋白质或mRNA的分布进行定性或定量研究；图像采集的效果很好；细胞或组织的三维重塑 (reconstructing) 本文档共48页；当前第4页；编辑于星期三\3点3分 组织切片技术 目的：观察胚胎的内部组织学结构 分类： 石蜡组织切片：石蜡包埋，切片机切片 冷冻切片：低温包埋剂包埋，低温切片机切片，对样品中核酸的保存较好，但切片的质量差。 本文档共48页；当前第5页；编辑于星期三\3点3分 分子生物学技术 目的：检测目的基因或蛋白质在某一发育时期或特定组织中的表达 分类： Polymerase chain reaction (PCR): DNA amplification Real-time quantitative PCR: RNA 定量 RT-PCR/Northern blotting: mRNA expression Western blotting: protein expression 免疫共沉淀 (Co-IP): protein-protein interaction 本文档共48页；当前第6页；编辑于星期三\3点3分 Northern Blotting Analysis 本文档共48页；当前第7页；编辑于星期三\3点3分 Southern Blotting Analysis 本文档共48页；当前第8页；编辑于星期三\3点3分 Real-time PCR 仪 本文档共48页；当前第9页；编辑于星期三\3点3分 原位杂交技术 目的：检测某一特定基因mRNA在某胚胎和组织中的分布情况 分类： 放射性标记探针：放射自显影 非放射性标记探针： 地高辛(DIG)-免疫组化 荧光素-荧光免疫组化 (FISH) 本文档共48页；当前第10页；编辑于星期三\3点3分 原位探测基因表达 Gene expressing guiding development When and where particular genes are active Intact embryos or sections of embryos In situ hybrid: probes-radioactive isotope, fluorescence tag or an enzyme Dectection: autoradiography, fluorescence microscope, enzyme-substrate reaction 本文档共48页；当前第11页；编辑于星期三\3点3分 原位探测基因表达 本文档共48页；当前第12页；编辑于星期三\3点3分 原位探测基因表达 Distribution of mRNA for the growth factor Vg-1 in t