海藻组织培养技术ppt课件.pptxVIP

u海藻切段培养 u海藻愈伤组织培养 u海藻细胞培养 u海藻原生质体培养 1 (Cystoseira)进行海藻组织培养试验。 n Chen和Taylor(1978)最早报道对红藻门皱波 角叉菜 (Chondrus crispus) 的髓部组织培养。 2 藻的外表皮细胞无角质层类的保护层，很容易受 损伤；同时由于寄生的微生物种类多，数量大， 所用的消毒剂和抗生素的量需加大，极易造成外 植体畸形或死亡； ②海藻的基础研究落后，缺乏控制其生长和分化的x 相关知识。 3 n 各种新的抗生素和清洗技术应用到大型海藻的组 织培养中，许多海藻成功的实现了组织培养。 n 同时对于愈伤组织产生的诱导条件进行了详细的 研究，包括各种培养条件，不同的培养基，产生 部位以及来源 (组织块，细胞，原生质体) 。 4 . (BradleyCheney 1990，YokoyaHandro 1996， Yokoya 2000) 等进行了详细的研究。 n 据统计迄今已有六十余种大型海藻通过原生质体、 组织切块实现了再生培养。 n 对于影响愈伤组织形成的物理因子，包括渗透压， 琼胶强度，盐度 (Robaina et al.1990，Yokoya et al.1999) ，营养盐包括甘油、有机碳源(Garcia -Jimenez et al.1998)，植物生长调节物质 5 短、环境条件人为控制不受季节限制、易 于工厂化生产等。 6 ② 次生代谢产物生产 7 个具有大型海藻种质库的国家之一， 目前已保存 了海带、裙带菜、紫菜的多个品系。 u苗种生产：利用植物离体繁殖进行大规模的苗 种生产。 目前，已在经济海藻的苗种生产研究中 取得了一定的进展。 8 n 曾庆国等 (2004) 以坛紫菜单个体细胞克隆培养 获得的叶状体，再用组织培养技术形成纯和丝状 体，然后进行海上养殖等。 9 u温带红藻Agardhiella subulata含有稀有的 通过脂肪氧化代谢产生的类花生酸 ( Graber等1996) 和具有抗滤过性病原体活 性的磺酸盐半乳糖体 (Witvrouw等1994) ； 10 洋溴过氧化物酶 (Roner等2001) 产生。 u另外，从海藻组织培养中还可以生产有用 的药物或其他活性物质如胡萝 卜素、红藻 色素等。 11 实验室器具洗涤与消毒 培养基配制与消毒 外植体准备与消毒 外植体切割与接种 外植体培养与观察 12 ER培养基 (Eriksson,1965) B5培养基 (Gambor等，1968) SH培养基 (Shenk和Hildebrandt，1972) HE培养基 (Heller，1953) 13 培养红藻和绿藻的PES培养基、MES培养基、 VAS培养基； 培养一般海藻的Erd (-shreiher) 培养基 和ESS培养基。 14 15 主要有： 绿藻常用Asp1培养基、Asp7培养基； 红藻常用Asp2培养基、Asp6培养基； 褐藻常用Asp12培养基； 绿藻常用KDX培养基。 16 17 试剂名称 用量/mg 试剂名称 用量/mg Na2-EDTA 3000 ZnCI2 25 H3BO3 2500 CoCI2·6H2O 10 MnCI2·4H2O 350 柠檬酸铁 60 FeCI3·6H2O 125 试剂名称 用量 试剂名称 用量 NaNO3 2.8g Tris 4g 甘油磷酸钠 0.4g 蒸馏水 700mL MP II 200mL 18 ② MES enrichment 原液的配制 养液加入到琼脂中，定容。 ⑤ 调pH 正常海水的pH值一般为8.1-8.3。 用1mol/L NaOH溶液调pH ⑥ 培养基的分装 用锥形瓶分装，培养基的量约为锥形瓶容 量的1/5~1/4，用2块硫酸纸中间夹1层牛皮纸 封盖瓶口，并用线绳捆扎，贴标签，待消毒。 19 的植物组织、器官等材料。 u外植体的来源： 生长在自然环境下 野生或栽培的海藻 20 u组织部位、植株年龄、取材季节以及植株 的生理状态和质量都对培养时器官的分化 有一定影响。 21 一般使用消毒海水反复清洗进行藻体消毒， 或者用碘化钾或次氯酸钠溶液进行藻体表 面消毒。 u海藻组织培养只能做到少菌而不能真正做 到无菌。 22 23 2 9-10 饱和溶液 0. 1-1 70-75 10-12 1-2 1 4-50mg/L 次氯酸钠 次氯酸钙 漂白粉 升汞 酒精 过氧化氢 溴水 硝酸银 抗生素 消毒剂 使用浓度/%* 消除难易 消毒时间/min 灭菌效果 很好 很好 很好 最好 好 好 很好 好 较好 5-30 5-30 5-30 2-10 0.2-2 5-15 2-10 5-30 30-60 易 易 易 较难 易