土壤铵态氮测定-靛酚蓝比色法.doc

土壤铵态氮测定（2 mol﹒L-1 KCl浸提-靛酚蓝比色法） 【方法原理】 2 mol﹒L-1 KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性燃料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5 mol﹒L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 【试 剂】 （1）2 mol﹒L-1 KCl溶液：称取149.1 g氯化钾（分析纯）溶于水中，稀释至1L。 （2）苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （3）次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （4）掩蔽剂：将400g﹒L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g﹒L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10 mol﹒L-1氢氧化钠0.5mL。 （5）2.5μg.ml-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4,分析纯]0.4717g溶于水中，定容至1L。即配制成含铵态氮（N）100μg.mL-1的贮存溶液；使用前将其加入水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg.mL-1的标准溶液备用。 【分析步骤】 浸提 称取相当于2g左右的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于10mL离心管中，加入氯化钾溶液8mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出5000-7000rpm离心3min，将悬液的上部清液收集于干燥洁净的容量瓶中，定容至10ml。如果不能在24h内进行，将滤液储存在冰箱中备用。 比色 吸取土壤浸出液2ml—10ml(NH4+-N，2μg-25μg)放入50mL比色管中，将氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液1mL和氯化钠碱性溶液1mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后，加掩蔽剂0.2mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。 工作曲线 分别吸取0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00mL NH4+-N标准液于50mL比色管中，各加10mL氯化钾溶液，同（2）步骤进行比色测定。 【结果计算】 土壤中NH4+-N含量（mg.kg-1）=c×V×ts/m 式中：c—显色液铵态氮的质量浓度（μg.ml-1）； V—显色液体积（mL）； ts—分取倍数； M—土样质量（g）。（0.2g左右新鲜土样烘干后对应的质量） 【注】显色后在20℃左右放置1h，再加入掩蔽剂。过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱；加入过晚则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。 土壤硝态氮的测定 【方法原理】 在波长220 nm 处，硝酸盐对紫外线光有强烈的吸收。溶解的有机质在波长220 nm 及275 nm 处均有吸收，而硝酸盐在275 nm 处没有吸收，从而可以通过测定275 nm 处的吸光度对硝酸盐的吸光度进行校正，校正吸光度A= A220-2A275计算硝态氮的含量。 【操作步骤?】 1、浸提： 称取风干土样10g，放在250mL三角瓶中，加入2mol/L KCl 50mL，用振荡机振荡1h。放置澄清后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集于干燥洁净的三角瓶中。 2、测定 吸取滤液 5～20mL（视NO3－—N浓度）置于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。 3、标准曲线的绘制 分别取10μg/mLNO3－—N标准液0、0.5、1、2、5、10、15mL于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。