DB50T 952-2019动物组织中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法.docx

I ICS 65.020.30 ICS 65.020.30 B 41 DB50 重 庆 市 地 方 标 准 DB50/T 952—2019 动物组织中赭曲霉毒素A 的测定 高效液相 色谱法和液相色谱串联质谱法 Determination of ochratoxin A in animal tissues HPLC and LC-MS/MS DB DB50/T 952-2019 2019-12-15 发布 2020-03-15 实施 重庆市市场监督管理局 发 布 II DB50/T 952-2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由重庆市农业农村委员会提出并归口。 本标准起草单位：重庆市动物疫病预防控制中心、重庆市兽药饲料检测所。 本标准主要起草人员：侯亚莉、周莉、李玉平、朱英才、盛欣、胡健、张毅、丁平、范首君、何义 刚等。 1 DB50/T 952-2019 动物组织中赭曲霉毒素 A 的测定 高效液相色谱法和液相色谱串联 质谱法 1 范围 本标准规定了动物组织中赭曲霉毒素 A 的测定方法。 本标准适用于动物肾脏、肝脏、肌肉组织中赭曲霉毒素 A 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单) 适用本文件。 GB/T 6628 分析实验室用水规格和试验方法 3 高效液相色谱法 3.1 方法原理 用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A，经免疫亲和柱净化后，采用高效液相色谱结合荧光检测器测 定赭曲霉毒素A的含量，外标法定量。 3.2 试剂和材料 3.2.1 水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 3.2.2 乙酸乙酯：分析纯。 3.2.3 磷酸：分析纯。。 3.2.4 碳酸氢钠：分析纯。 3.2.5 乙酸铵：分析纯 3.2.6 甲 醇：色谱纯。 3.2.7 乙腈：色谱纯 3.2.8 1 mol/L 磷酸溶液：称取磷酸 115.3 g，用水溶解并稀释至 1000 mL。 3.2.9 0.05 mol/L 碳酸氢钠溶液：称取碳酸氢钠 21 g，用水溶解并稀释至 500 mL。 3.2.10 赭曲霉毒素 A 标准品：纯度大于99﹪。 3.2.11 赭曲霉毒素 A 标准储备溶液：精确称取标准品 0.0100 g (精确至 0.0001 g) ，置于 10 mL 棕色 容量瓶中，用甲醇定容，得浓度为 1mg/mL 的标准储备溶液。2 ℃~8 ℃保质期 3 个月。 3.2.12 赭曲霉毒素 A 标准中间溶液：准确移取标准储备溶液 1 mL，置于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲 醇定容至刻度，标准品浓度为 0.1 mg/mL 。2 ℃~8 ℃保质期 1 周。 3.2.13 赭曲霉毒素 A 标准工作溶液：准确移取赭曲霉毒素 A 标准中间溶液适量，用乙腈—水溶液 (55+45，体积比) 配制成浓度为 0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL 和 10 ng/mL 的标准工作溶液。现用现配。 3.2.14 淋洗缓冲液：称取 12.5 g 氯化钠、5 g 碳酸氢钠溶于水中，加入 0.1 mL 吐温-20，用水稀释至 1000mL。 3.2.15 洗脱液：甲醇— 乙酸溶液(49+1) ，量取 490 mL 和 10 mL 的乙酸，混匀。 2 DB50/T 952-2019 3.2.16 微孔滤膜：0.22μm ，有机系。 3.2.17 赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱：规格 3mL，柱容量≥100ng，或等效柱。 3.3 仪器和设备 3.3.1 分析天平：感量 0.1 mg ，0.01mg。 3.3.2 液相色谱仪：配荧光检测器。 3.3.3 组织捣碎机。 3.3.4 旋涡混匀器。 3.3.5 氮吹仪。 3.3.6 振荡器。 3.3.7 离心机：转速不低于 5000 r/min 3.3.8 PH 计：精度为 0.01。 3.4 试样的制备与保存 取代表性样约100 g，用组织捣碎机捣碎，装入试样袋，密封并做好标识，于-20 ℃下保存。 3.5 提取与净化 3.5.1 样品的提取 准确称取待测样品2g (精确至0.001 g) ，置于50 mL离心试管中，加0.6 mL磷酸溶液(3.2.8) ，涡 旋混匀，放置15 min后，加入5ml乙酸乙酯提取，涡动3分钟，4000 rpm离心5分钟，将上清液转入另一 个50 mL离心管中。重复提取3次，合并3次上清液。上清液加入5 mL的碳酸氢钠溶液(3.2.9) 涡动3分 钟，4000 rpm离心5分钟，