《菌种提取与检验实习总结报告》3500字.docxVIP

菌种提取与检验实习总结报告 TOC \o 1-2 \h \u 31561 一、实践内容 1 22900 （一）菌种提取 1 28723 （二）菌种分离 1 17573 （三）菌株生化鉴定 1 14320 （四）菌株保藏 3 7191 （五）菌种活化 3 17854 二、承担的任务 3 21985 三、实践成果 3 4062 四、实践体会 4 一、实践内容 （一）菌种提取 （1）制备样品稀释溶液 称取样品10克，将其放入盛有90毫升无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶中，振动约20分钟，使土样与水分混合，并将细胞分散。用一支1毫升无菌吸管从中吸取1毫升土壤悬液，然后加入盛有9毫升无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1毫升加入另一个盛有9毫升无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀释度的土壤溶液。 （2）涂布 用无菌吸管分别从10-4，10-5，10-6三管土壤稀释液中各取0.1毫升对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5—10分钟，使菌液吸附进培养基。 （3）培养 置于37℃温室培养箱，培养24小时， 固体培养基组成：蒸馏水1升,葡萄糖20克,蛋白胨15克,氯化钠5克,牛肉膏0.5克,琼脂20克 （二）菌种分离 用接菌针挑取单个菌落，接菌到固体培养基。培养24小时。 固体培养基组成同上。 （三）菌株生化鉴定 1. 革兰氏染色 （1）制片 取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。 （2）初染 滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2分钟，水洗。 （3）媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。 （4）脱色 用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般约20-30秒。 （5）复染 用番红染液复染约2分钟，水洗。 （6）镜检 干燥后，用油镜观察。 菌体被染成蓝紫色是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。 2. 芽孢染色：改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 （1）制备菌悬液：加1—2滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2—3环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 （2）加染色液：加5%孔雀绿水溶液2—3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 （3）加热：将此试管浸于沸水浴的烧杯中，加热15—20分钟。 （4）涂片：用接种环从试管底部挑数环菌液于洁净的载玻片上，做成涂面，晾干。 （5）固定：将涂片通过酒精灯火焰3次固定。 （6）脱色：用水洗直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 （7）复染：加番红染液染色2-3分钟后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。 （8）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜观察。 结果：芽胞呈绿色，芽胞囊和菌体为红色。 （四）菌株保藏 （1）贴标签 取各种无菌斜面试管数支，将注有菌株名称和接种日期的标签贴上，贴在试管斜面的正上方，距试管口2～75px处。 （2）斜面接种 将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至固体培养基试管斜面上。 （3）培养 细菌37℃恒温培养18～24小时 （4）保藏 斜面长好后，可直接放入4℃冰箱保藏。为防止棉塞受潮长杂菌，管口棉花应用牛皮纸包扎，或换上无菌胶塞，亦可用熔化的固体石蜡熔封棉塞或胶塞。 （五）菌种活化 1、一级扩大培养 将保藏的枯草芽孢杆菌接种到升B培养基中，选用50毫升锥形瓶，内置15毫升培养基，置于37℃，摇床震荡培养24小时。 2、二级扩大培养 升B培养基，选用250毫升锥形瓶，内置70毫升培养基，接菌量为5%，置于37℃，摇床培养24小时。 3、三级扩大培养 升B培养基，选用500毫升锥形瓶，内置150毫升培养基，接菌量为5%,10%，15%，20%，置于37℃，摇床培养12小时，测定OD值，并每隔两小时检测一次，由此确定枯草芽孢杆菌生长对数期，为下一级接种奠定基础。 二、承担的任务 我的主要工作是主要是枯草芽孢杆菌的培养和保藏。 三、实践成果 实习过程中,每个人抱有的实习目的可能都不一样,有的人是为了丰富自己的履历;有的人是为了提高自己的实践能力;有的人是为了补贴自己的生活费;有的人是被家人或学校逼迫去实习;还有的人是为了打发时间。然而无论我们是出于何种目的,都要清楚自己去实习的目的。只有这样你才知道自己该不该去实习,才能找到适合自己的路。 本次前往XX公司进行实习工