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结核菌素试验 一、结核菌素(Tuberculin) (一)定义：由人工培养的结核杆菌的培养滤液 制成的一种生物制品，其有效成份为结核蛋白。 (二)使用： ≥ 3 月的婴幼儿接种卡介苗前筛选。 测试卡介苗接种后是否有效，于接种后12周进行， 阳性者表示接种成功。 (其他略) (三)品种： OT、PPD (TB-PPD、BCG-PPD等)。 (四)规格： 1ml/ 支、 10 人份，每毫升含 PPD 1μg，相当于50个国际结素单位。 1．旧结素(Old Tuberculin OT)：以Koch最初方 法制成的结素。由于其制作简易，性质稳定，所以在较 长时间内一直使用。缺点是含杂质多，不易标准化，不 同生产单位或同一单位生产的各批效价不一。 2．纯蛋白衍化物(Pure Protein Derivatine PPD) ：用化学方法从结核菌培养液中提取出较纯结核蛋白而 制成的一种固体状结素。其纯度高，特异性强，可以标 准化，因此逐步取代了旧结素。 二、皮试 (一)方法； 皮内注射法 ( Mantoux 法)， 最大 优点是剂量和结果都较准确。 (二)部位： 左前臂掌侧中间 。 如有疤痕、血管 瘤等无法注射时，可换臂，但需注明。 (三)剂量： 0.1ml/人次。 (四)观察： 72小时。 三、反应机制 结素反应属于细胞介导的迟发型(Ⅳ)变态反应， 是由结核蛋白与携带免疫信息的小淋巴细胞(致敏T 淋巴细胞)接触后产生的变态反应。结核蛋白在生产 提取过程中发生部分变性，抗原成份已不完整，是半 抗原，其本身不能使动物致敏，只有加上腊质丁( Wax D )才能使动物致敏，而腊质丁正是结核菌外壳 的组成成份。故只有当机体受到结核菌或卡介苗感染 后方能形成致敏T淋巴细胞而对结素产生反应，而非 感染者不对结素产生反应。 结素反应共有二个阶段，第一个阶段是特异性阶 段。当结素进入致敏机体后，与循环中的致敏T淋巴细 胞接触，刺激T淋巴细胞释放大量免疫活性物质——淋 巴因子，如巨噬细胞游走抑制因子、转移因子、皮肤 反应因子、趋化因子、巨噬细胞凝集因子、淋巴毒素 等。第二个阶段是非特异性阶段。释放出的这些活性 物质可以促使巨噬细胞向有反应原的地方游走、聚集、 发育、繁殖，可以使局部血管扩张，通透性增加，导 致局部充血、渗出， 更多的细胞从血管向外浸润，在 24 小时后局部出 现红晕和硬结， 48—72小时达到高峰，形成肉眼可见 的局部皮肤反应，反应强烈者可出现水泡、溃疡，严 重者可见前臂肿胀，疼痛、发热、周身不适等。 红晕是局部血管扩张所致，对判断机体致敏无意 义，而硬结是水肿加巨噬细胞浸润所致，是判断机体 致敏的依据。 四、禁忌症 1．发热(T＞37.5℃) 2．各种传染病及恢复期。 3．各种器质性疾病如心脏、血管系统、肾脏、肝脏 和胃肠等疾病急性期。 4．身体极度虚弱者。 5．患有局部或全身性皮肤病。 6．防御机制不健全者，如免疫缺陷，丙种球蛋白缺 乏者。 7．其他预防接种不到二周者。 8．本人或家属有过敏史或变态反应史。 9．神经及精神不正常，易出现晕厥、休克、癫痫等 情况者。 五、操作 1．试验前先核对药名、剂量、有效期及婴幼 儿，如有沉淀、安瓿破损及过期者不得使用。 2．用75%酒精消毒皮肤。 3．应用一次性注射器，刻度和针孔斜面一致 向上与皮肤平行刺入皮内，缓慢准确地注射0.1ml (含5U PPD)呈直径约为6-10mm大小白色隆起， 不要揉搓，会自行消退，不要用酒精棉球(签) 按压针眼。 4．干扰因素： a、光线：直接日光照射10分钟，结素效价减少80%。 1955年WHO曾做过这样的研究，用光照射过的结素为接 种卡介苗的学生做测定，同时设对照组。结果发现光照 组90%以上反应减弱，较对照组相差最大达8mm。 b 、温度：保存温度偏高可使结核蛋白变性而降低 效价，时间长了则结素会完全失效。 c、技术：注射剂量不足，未摇均匀，注射较深、 验看不仔细不熟练等。 六、观察 1．时间： 72小时。 2．方法：一看、二摸、三量。看局部有无红晕、 双圈、水泡等。对衣袖较紧者，撸起袖子时要稍等片 刻再观察，否则会误为阴性。用手指上下、左右轻轻 来回触摸，不能挤捏，容易造成疼痛和假阳性。触摸 后用尺测量硬结边缘，根据手臂的纵横径垂直交叉各 测量一次，以毫米为单位记录，如10×12mm。 3．计算记录硬结平均直径：横径+纵径/2。 4．结果标准： 我国现将结素试验反应结果分为三类： 阴性：无硬结或硬结平均直径＜5mm； 阳性：硬结平均直径5-19mm； 强阳性：硬结平均直径≥15mm (成年人为20mm)， 或有双圈、水泡、溃疡、皮疹等。如无20 mm，但有双 圈、水泡、溃疡、皮疹等也为强阳性。 —— 硬结平