抗原抗体反应的应用课件.pptxVIP

第三节 抗原抗体反应的应用 一、免疫沉淀与免疫凝集 二、免疫标记 三、免疫定位分析 四、抗原抗体反映的其他应用 可编辑ppt 1 一、免疫沉淀与免疫凝集 1. 溶液中的环状沉淀试验 n 在体外可溶性抗原与相应抗体形成肉眼 看见的沉淀物。 n 在液相中形成的沉淀不容易观察判断， 利用抗原和抗体溶液之间的界面形成的 沉淀线便于观察。 可编辑ppt 2 环状沉淀实验示意图 可编辑ppt 抗血清 沉淀线 抗原 抗血清稀释度 对照 1:160 1:80 1:10 1:40 1:20 3 n 抗原抗体在半透明的半固相介质中进行沉淀实验。 抗原分子与抗体分子在凝胶介质中自由扩散，相 遇形成沉淀。 n 以琼脂扩散实验较为常用。 1) 单向免疫扩散：抗体混于琼脂中，小孔中加入 抗原，抗原向周围均匀扩散，与抗体形成沉淀环。 可用于定量测定免疫球蛋白和补体的含量等。 2) 双向免疫扩散：抗原和抗体向周围扩散后可在两 孔之间形成白色沉淀线，可用于抗原或抗体的定 性检测。 n 缺点：时间长，灵敏度低。 2. 凝胶扩散沉淀 可编辑ppt 4 单向免疫扩散：常用于测定IgG、IgM、 IgA、C3、C4等。 沉淀环 环的直径与抗原 含量成正相关 5 抗体混于琼脂 凝胶中制板 可编辑ppt n双向免疫扩散——沉淀线形状的变化显示抗原间是否 存在共同的抗原决定簇。 Ab 可编辑ppt 6 Ab Ag1 ，3 Ab 3.电泳条件下的沉淀反应 1) 血清免疫电泳：患者血清和正常人血清分别 放在凝胶上近负极端的小孔中进行电泳分离 后，在两种抗原之间沿电泳方向挖一平行的 小槽，加入抗血清进行双扩散。 2) 火箭电泳：单向免疫扩散与电泳结合的一种 方法。在电场作用下抗原向正极扩散，与抗 体形成沉淀峰(火箭型沉淀线)。需时短， 能检测微量抗原。 3) 对流电泳(电渗析)：在电场作用下抗原与抗 体相对扩散，形成沉淀线。对流电泳较双扩 快速和灵敏。 可编辑ppt 7 可编辑ppt 8 可编辑ppt 9 可编辑ppt 10 在溶液中两种或两种以上蛋白质相互 作用，可以通过免疫共沉淀惊醒鉴定和分 离。 蛋白质相互作用通过非共价结合，用 针对其中一种蛋白质的特异性抗体进行的 免疫沉淀，与该蛋白相互作用的其他蛋白 也同时被沉淀下来。 如果第一抗体结合后再加入第二抗体或 A蛋白可使抗原抗体形成更大的复合物易于 沉淀，也可通过加入聚乙二醇破坏水化膜 加速沉淀形成。 可编辑ppt 4.免疫共沉淀 11 免疫共沉淀原理图解 可编辑ppt 12 5.免疫凝集 n 大颗粒性抗原如细胞或细菌等与相应的抗体结 合后能使康媛颗粒发生凝集，形成肉眼易见的凝 集小块，即为免疫凝集。 n 凝集反应的发生分为两个阶段： 1、抗原抗体 的特异性结合阶段； 2、出现肉眼可见的凝集现象。 可编辑ppt 13 最常见的免疫凝集反应是红细胞凝集，即 血凝反应。 血凝反应的抗体识别的抗原可以是红细胞 表面的天然抗原，如血凝鉴定试验；也可以通 过交联将红细胞连接上其他抗原，如早期的 HBsAg血凝试验。 可编辑ppt 14 细菌的血凝试验常用来 对细菌进行鉴