20.化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法.docxVIP

附件20 化妆品中a-熊果甘等4种原料的检验方法 a-Arbutin and other 3 kinds of components in cosmetic 1范围 本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中a-熊果甘、熊果甘、氢醒和苯酚的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、面膜类、粉类化妆品中a-熊果昔、熊果 甘、氢酶和苯酚含量的测定。 2方法提要 样品经甲醇超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，荧光检测器检测，根据保留时间定 性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。如有阳性结果，应用液相色谱-串联质谱法、气相 色谱-串联质谱法进行定性确证。 本方法中a-熊果昔、熊果昔、氢醍和苯酚的检出限、定量下限及取样量为1.0g时检出浓度 和最低定量浓度见表1。 表1 a-熊果昔、熊果昔、 氢醍和苯酚的检出限、定量下限、 检出浓度和最低定量浓度 序号 原料名称 检出限 (ng) 定量下限 (ng) 检出浓度 (Ng/g) 最低定量浓度 皿/g) 1 a-熊果首 1.0 2.5 2.0 5.0 2 熊果甘 1.0 2.5 2.0 5.0 3 氢醍 0.10 0.30 0.20 0.60 4 苯酚 0.10 0.30 0.20 0.60 注：本方法中的熊果甘即指隹熊果昔。 3试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 甲醇，色谱纯。 微孔滤膜(0.45 |im)。 标准品：a-熊果苜等4种原料的标准品信息详见附录A。 标准储备溶液：分别称取a-熊果甘等4种原料标准品(3.3)各10 mg (精确至0.00001 g), 置于不同10 mL容量瓶中，用甲醇(3.1)溶解并定容至刻度，配制成浓度均为1 mg/mL的标准 储备溶液。 4仪器和设备 高效液相色谱仪，荧光检测器。 天平。 离心机，转速不低于14000 r/min。 超声波清洗器。 涡旋振荡器。 步骤 混合标准溶液的制备 分别准确量取a-熊果昔标准储备溶液(3.4) 1 mL、熊果昔标准储备溶液(3.4) 1 mL、氢 醍标准储备溶液(3.4) 0.1 mL和苯酚标准储备溶液(3.4) 0.2 mL,置同一个10 mL容量瓶中， 用甲醇(3.1)定容至刻度，配制成a-熊果昔、熊果昔、氢醍和苯酚浓度分别为100、100、10、 20 jig/mL的混合标准溶液。 混合标准系列溶液的制备 准确量取不同体积的混合标准溶液(5.1),用甲醇(3.1)配制成浓度如表2所示的混合标 准系列溶液。 表2标准储备溶液浓度及混合标准系列溶液浓度 序号 原料名称 标准储备溶液浓度 (|ig/mL) 混合标准溶液浓度 (|ig/mL) 混合标准系列溶液浓度 (|ig/mL) 1 a-熊果昔 1000 100 0.25 0.5 1 2 8 20 2 熊果昔 1000 100 0.25 0.5 1 2 8 20 3 氢醍 1000 10 0.025 0.05 0.1 0.2 0.8 2 4 苯酚 1000 20 0.05 0.1 0.2 0.4 1.6 4 5.3样品处理 称取样品1.0g (精确至0.001 g),置10 mL具塞比色管中，加入甲醇(3.1)至刻度，涡旋 振荡30 s,使样品与提取溶剂充分混匀。密塞，超声提取20 min,放置至室温，取适量样品溶 液离心(转速14000 r/min) 5 min,取上清液经微孔滤膜(0.45 pm) (3.2)过滤，取续滤液作 为待测溶液。必要时用适量甲醇(3.1)稀释。 参考色谱条件 色谱柱：C18柱(4.6 mmx250mm, 5 gm),或等效色谱柱； 流动相：A：水，B：甲醵(3.1)；梯度洗脱程序详见表3；柱温：20 ℃； 流速：0.5 mL/min； 进样量：5(1L； 检测波长详见表4。 表3流动相梯度洗脱程序 时间/min V (A) /% V (B) /% 0.0 95 5 21.0 95 5 22.0 55 45 43.0 50 50 48.0 50 50 48.1 0 100 50.0 0 100 50.1 95 5 60.0 95 5 表4 *熊果昔、熊果昔、氢酶和苯酚的检测波长 序号 原料名称 激发波长(nm) 发射波长(nm) 1 a-熊果昔 292 337 2 熊果甘 292 337 3 氢醍 298 345 4 苯酚 280 318 5.5测定 在“5.4”色谱条件下，取混合标准系列溶液(5.2)分别进样，进行色谱分析，以标准系 列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.3”项下的待测溶液进样，根据保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待 测溶液中a-熊果昔、熊果昔、氢醍和苯酚的浓度。按“6”计算样品中a-熊果甘、熊果甘、氢 酶和苯酚的含量。必要时按附录