结核病的实验室诊断技术及应用.pptVIP

DNA用于临床检验的不足 “死菌检测呈阳性”，与临床相关性差 不能区分“潜伏感染”“活动性感染” 易交叉污染 反应易受抑制 本文档共51页；当前第30页；编辑于星期二\18点48分 NASBA（国外） TMA（国外） SAT（国内） 四、常见的RNA检测技术 本文档共51页；当前第31页；编辑于星期二\18点48分 SAT技术是将核酸恒温扩增和实时荧光 检测相结合的一种新型RNA检测技术。 TB—SAT 检测技术 本文档共51页；当前第32页；编辑于星期二\18点48分 TB-RNA释放 恒温扩增 实时检测 超声波（300W） 15 min 痰液预处理 42℃ 40 min 与反应液混合 60℃10 min 42℃ 5 min TB-SAT操作流程 50 μl 稀释液 全程2小时，会做PCR，就学的会SAT 本文档共51页；当前第33页；编辑于星期二\18点48分 TB-SAT检测技术优点 本文档共51页；当前第34页；编辑于星期二\18点48分 RNA诊断技术的优势 灵敏度高：RNA ≥ DNA拷贝数 与临床相关性好：区分“死活菌”： 减少抗生素滥用 可以诊断“活动性感染”： 活动性感染：RNA转录活跃 潜伏感染：RNA不转录 不易污染：靶标和扩增产物都是RNA 本文档共51页；当前第35页；编辑于星期二\18点48分 TB-SAT检测区分MTB和NTM 结核分枝杆菌复合群（MTB）： 人型结核分枝杆菌 牛型结核分枝杆菌 非洲型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌（NTM）： 研究表明，TB-SAT可以区分如下NTM：堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、海分枝杆菌等18种 Novel Real-Time Simultaneous Amplification and Testing Method To Accurately and Rapidly Detect Mycobacterium tuberculosis Complex J.Clin.Microbiol.2012,50(3):646.DOL:10.1128/JCM.05853-11. 本文档共51页；当前第36页；编辑于星期二\18点48分 活菌检测技术，可用作肺结核治疗效果评估 据文献报道：每个结核分枝杆菌含有约2000个拷贝rRNA 研究表明：rRNA与结核分枝杆菌的生活力有着很好的相关性， rRNA可以反映结核分枝杆菌的死菌活菌状态 研究表明：在用药治疗期内，随着结核分枝杆菌的死亡，rRNA大约在7天左右时间全部降解。而DNA含量几乎保持不变 VIVIAN JONAS,et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept.1993, p.2410-2416 CLAUDIO PIERSIMONI, et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.1997, p.193–196. GABRIELLE M. E. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 本文档共51页；当前第37页；编辑于星期二\18点48分 免疫法常有既往感染问题 SAT更有利于治愈判断 窗口期 时间示意 相对浓度示意 抗体 RNA DNA 病原体感染前后各检测靶标的含量变化 死菌的RNA快速降解，有助治愈判断 用药 治疗 DNA需要一段时间降解 RNA快速降解 本文档共51页；当前第38页；编辑于星期二\18点48分 相比DNA,RNA检测能更好的体现疗效 服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度变化，相比 DNA,RNA与药物浓度变化的符合率更高，RNA检测能更好的进行疗效评估。 GABRIELLE M. E. Assessment of Mycobacterial Viability by RNA Amplification. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 DNA RNA 本文档共51页；当前第39页；编辑于星期二\18点48分 SAT与培养的监测结果一致， 可应用于疗效评估 胡永领，刘成永，成松. 应用RNA恒温扩增实时荧光检测技术观察抗结核药物的疗效. 海峡药学,2015年第27卷第1期 SAT在抗结核治疗药物效果检测方面，虽不能直接作出药物敏感试验，但可以最快地直接判断所用药物的疗效，及时调整药物使用，可大大降低医疗成本和耐药产生的机会，大幅度减少医疗时间和费用。 本文档共51页；当前第40页；编辑于星期二\18