《柑橘黄龙病检测鉴定技术规程》.pdfVIP

DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB36/ ×××××—2018 柑橘黄龙病检测鉴定技术规程 （送审稿） 2018—××—××发布 2018—××—××实施 江 西 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 柑橘黄龙病检测鉴定技术规程 1 范围 PCR 本标准规定了柑橘黄龙病的田间诊断症状及实验室 检测鉴定技术要求。 本标准适用于柑橘类植物感染柑橘黄龙病植株的PCR检测和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本规程的标准。凡是注日期的引用 文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包 括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5040柑桔苗木产地检疫规程 3 术语与定义 3.1 CitrusHuanglongbing HLB 柑橘黄龙病 ， 柑橘黄龙病是由革兰氏阴性细菌引起的一种系统性侵染病害，在田间主要通过 柑橘木虱、接穗嫁接、菟丝子传播，植株感病后主要表现出叶片斑驳状黄化，果实 沿中轴向一侧歪斜，着色与正常果实相反，又称 “红鼻果”，果小质劣，是一种重 要的检疫性病害。 3.2 聚合酶链式反应 PolymeraseChain Reaction，PCR 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。 3.3 扩增引物 Primer 人工合成的寡核苷酸序列，用于引导DNA体外扩增。 3.4 扩增模板 Templet DNA体外扩增中所用的待扩增的靶标序列。 3.5 电泳 Electrophoresis 带电分子在恒压电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳。利用 不同大小的DNA分子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为DNA电泳技术。 4 柑橘黄龙病菌的基本信息 Proteobacteria α- 分类地位：现在获得广泛认可的分类地位为：变形菌门 （ ）， 变形菌纲（Alphaproteobacterial），根瘤菌目（Rhizobiales），根瘤菌科（Rhizobiaceae）， Candidatus Liberibacter 韧皮部杆菌属 （ ）。现今共发现三个种与植物上柑橘黄龙病 的发生相关，分别为韧皮部杆菌亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus （CaLas）， 韧皮部非洲种Candidatus Liberibacter africanus和韧皮部杆菌美洲种Candidatus Liberibacter americanus，目前这三个种均没有广泛有效的方法获得人工纯培养，我 国病区及江西省内广泛流行的病原菌为其中的CaLas。 柑橘黄龙病的其他信息请参看附录A。 PCR 本标准规定了针对韧皮部杆菌亚洲种和非洲种的 检测方法。 5 方法原理 柑橘黄龙病的病原菌属难培养菌，目前尚无广泛有效的方法进行人工培养，因 此不可以通过传统微生物培养的方法来鉴定病害。根据韧皮部杆菌亚洲种的16S 核 DNA PCR 糖体序列设计一对特异性引物，采取病原菌特异性 片段体外 扩增的方