总大肠菌群检验（14页）.pptx

大肠菌群检验 周小林 副教授 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 教学内容 1.大肠菌群检验原理； 2.大肠菌群检验的程序； 3.检测各环节操作规范。 （ 2） 技能目标 • 掌握大肠菌群检验的总体程序； • 掌握乳糖发酵检验的操作技能； • 掌握伊红美蓝平板检验的操作技能； • 掌握检验结果报告的方法 。 （ 3） 素质态度要求 态度端正 ， 积极主动学习 ， 严守操作规范 ， 团结协作 。 （ 1） 知识目标 • 大肠菌群的性状特征； • 多管发酵法检验原理； • 检验各环节的特征性表现 。 教学目标 一 、大肠菌群检验原理与程序 大肠菌群是水体粪便污染的指示菌 。 天然水体的细菌性污染主要源于 生活污水中的粪便 ， 其中可能病原菌种类很多 ， 而大肠菌群是数量最大的 ， 可以用作水体粪便污染状况的指示菌。 大肠菌群的类别特征： 37℃24~48h能利用乳糖产酸产气 ，好氧和兼性 厌氧 ， G - ， 无芽胞。 能在伊红美蓝培养基上产生特征性菌落： 有核心 ， 带金属光泽 ， 深紫 色； 深黑色 、不带或略带金属光泽； 淡紫红色 、 中心较深。 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 检验程序： 乳糖发酵检验 伊红美蓝平板分离检验 革兰氏染色 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 准备工作： （ 1） 制备培养基 乳糖蛋白胨培养液： 成分： 蛋白胨10g 、牛肉膏3g 、乳糖5g 、氯化钠5g 、水1000ml， 溴甲酚紫乙醇液（16g/L） 1ml。 制法： 调pH7.2~7.4后加入溴甲酚紫乙醇液 ， 分装于装有倒管 的试管中（每管10ml） 。 115℃20min。 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液： 除水外加倍。 大肠菌群检验 伊红美蓝培养基： 成分： 蛋白胨10g 、磷酸氢二钾2g 、琼脂20g 、水1000ml ， 乳糖10 g； 伊 红水溶液（20g/L） 20ml 、美蓝水溶液（5g/L） 13ml。 制法： 调pH7.2后加入乳糖 ， 115℃20min 。倒平板前加入伊红美蓝。 制备无菌生理盐水 。 （ 2） 培养皿 、试管 、移液管等玻璃器皿的灭菌； 二 、乳糖发酵检验 生活饮用水 —— 原始水样 ， 接种10ml到双料液中（或加1个10倍无菌生 理盐水稀释液 ， 接种1ml到单料液中） 。 出厂自来水 —— 原始水样接种10ml到双料液中 ， 1ml 10倍无菌生理盐水 稀释液接种到单料液中。 水源水 —— 10倍无菌生理盐水递交稀释到10－3 ， 3浓度各1ml接种到单料 液中； 污染严重可加大稀释度。 每个样品接种均为5重复。 36℃培养24h。 产酸（变黄色） 产气者报告为乳糖检验 阳性 ， 进入下一步检测。 二 、乳糖发酵检验 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 三 、伊红美蓝平板分离检验 取发酵液接种到伊红美蓝培养基平板（划线分 离） ， 36℃培养24h。 具备下列大肠菌群典型菌落特征的为阳性管： 有核心 ， 带金属光泽 ， 深紫色； 深黑色 、不带或略带金属光泽； 淡紫红色 、 中心较深。 大肠菌群G - 或复发酵（乳糖蛋白胨培养 液培养） 产酸产气。 四 、革兰氏染色检验 五 、MPN检索报告 经过前面三个环节的检验 ， 得到证 实的各稀释度的大肠菌群阳性管数； 查阅总大肠菌群MPN检索表 ， 得到 MPN/100ml值； 再乘以测定3稀释度中的最小稀释 倍数 ， 报告数值； 如果所有乳糖发酵管均为阴性 ， 则 报告未检出。 大肠菌群最可能数(MPN)检索表 划线方法、取菌前后的操作规范、划 线操作规范 考核指标 是否规范 无菌操作、整个过程操作的规范性 是否熟练、规范 ，判断是否准确 方法是否正确 六 、任务考核 平板分离培养 考核内容 培养基制作 乳糖发酵 革兰氏染色 数量检索与报告 20 分值 25 20 15 20 谢谢！