液相色谱(必威体育精装版整理版).pptxVIP

高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。;液相色谱仪;(一)、HPLC与经典LC区别;(二)、HPLC与GC异同点;流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用。 HPLC：流动相为液体 组分与流动相和固定间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用。 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性;流程及主要部件;三、高效液相色谱法的特点和应用;1 按固定相的聚集状态可分为： 液?液色谱法(LLC) 液?固色谱法(LSC) ;四、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC;2.主要部件;(2)梯度淋洗装置;;(3) 进样装置;(4) 高效分离柱;常用检测器种类 紫外检测器（UVD）应用最多。 荧光检测器（FD）灵敏度较高。 电化学检测器（ECD） 示差折光检测器（RID）是泛用型检测器，灵敏度不高。 蒸发光散射检测器（ELSD）新型检测器。 发光检测器是有发展前途的新型检测器。;一、液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatograph 二、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph 三、离子交换色谱 ion-exchange chromatograph 四、离子对色谱 ion-pair chromatograph 五、排阻色谱 size- exclusion chromatograph 六、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph;一、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography;二、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography;固定相有机基团主要有三类：1.疏水基团:如不同链长的烷烃（ C8 ，C18 ，C6等）。2.极性基团：如丙胺基，氰乙基，醚和醇等。3.离子交换基团：如作为阴离子交换基团的胺基，季铵盐。作为阳离子交换基团的磺酸基等。;三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography;基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长。 阳离子交换： 阴离子交换： 离子交换反应达到平衡时，保留值决定于平衡常数。容量因子k’与平衡常数K成正比，且与流动相中的反离子浓度（M+、X-）成反比。 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸、蛋白质等。;? 离子交换色谱法由于没有与之相匹配的检测器，难以发挥更大的作用。无机离子与大多数有机离子不同，只有在远紫外区才有吸收，光度检测器不适于检测无机离子，而电导检测器却是可检测电解质溶液的通用型检测器，这种检测器简单易于操作，但是长时间以来没有一种可以和电导检测器相适应的分离模式。 直到 1975年Small才提出把电导检测器用于离子交换色谱，他为了克服洗脱液中的离子对电导检测器的干扰。在分析柱和检测器之间增加一个“抑制柱”，消除洗脱液中离子本身带来的本底电导，他把这一方法叫做“离子色谱”（Ion Chromtatography）。这一方法提出之后受到普遍的重视，20多年来得到了长足的发展，成为分析无机和有机离子十分重要的方法，在各领域中得到广泛的应用。 ;离子色谱仪;离子色谱法 principle of IC;离子色谱装置类型suppressed apparatus of IC;抑制柱为高容量的强酸性阳离子交换剂。当试样经阴离子交换剂的分离柱后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应： ;离子色谱连续抑制装置图;若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离往后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应： ; 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。