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hplc法测定畜禽肉中呋喃唑酮和地塞米松 目前，动物饲料中残留药物的情况更为严重。二甲苯和替代苯是相对常见的两种残余药物。兽药在动物性食品中的残留,不仅对人体健康造成直接危害,而且对畜牧业发展和生态环境也造成极大危害。长期食用兽药残留的食品,会造成兽药在体内蓄积,当其浓度达到一定量时,就会对人体产生多种急性或慢性中毒。地塞米松是激素类药物,能扰乱体内激素分泌,降低机体免疫力,造成肌肉萎缩无力,骨质疏松和生长迟缓等直接危害,而且还会出现发热,软弱无力,精神沉郁,食欲不振,血糖和血压下降等症状。呋喃唑酮已于2002年6月5日被农业部列为禁用兽药,严禁在任何食品中应用。呋喃唑酮在肉品中残留会对人类造成潜在危害,表现为溶血性贫血、多发性神经炎、眼部损害和急性肝坏死等症状。长期应用,能引起出血综合症,而且有致突变和致癌的危险。。 国内外检测畜禽肉品中的呋喃唑酮和地塞米松的方法较多,但是都是单一的检测其中的一种兽药残留,而且检测周期比较长。本文旨在建立一种可同时检测畜禽可食性组织中呋喃唑酮、地塞米松HPLC检测方法,可望用于这两种兽药的快速检测。 1 材料和方法 1.1 样品采集 1.1.1 采样地点的选择 产地采样点:甘肃省甘南、临夏、酒泉各大屠宰厂。 消费市场采样点:兰州市、天水市、敦煌市各大菜市场和综合超市。 1.1.2 采样周期和采样数量 自2006年起直至2009年,每一个季度集中采集一次样品。 1.1.3 运输和保存设备 每份样品采集350g,样品数量330份,运输和保存有冷藏设施。 肉类按照国家有关标准执行,保存和运输的过程中,要将样品置于0～4℃,密封。 1.2 设备和设备 1.2.1 xb-c38 岛津LC20A高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器;色谱柱 Welch Materials XB-C18(250mm×4.6mm,5μm);旋转蒸发仪(BUCHI B-490);氮吹仪(HGC-12A);固相萃取装置(SUPELCO);固相萃取柱HLB:60mg/3mL。 1.2.2 标准储备液的配制 地塞米松标准品(纯度≥99%)、呋喃唑酮标准品(纯度≥99%)、乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、二氯甲烷。 醋酸缓冲液:3mol/L(pH值5.2),取无水乙酸钠123.05g,加入乙酸25mL,加水溶解稀释至500mL。 标准储备液:分别准确称取呋喃唑酮、地塞米松标准品10.0mg,甲醇溶解并稀释成浓度为100mg/L的标准储备液。 标准工作液:准确量取上述标准储备液,用流动相稀释,使得呋喃唑酮和地塞米松的浓度均分别为5、10、20、 80、160、400μg/L,随配随用。 1.3 检测方法 1.3.1 样品制备 从全部样品中取出代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装入洁净容器内。在-18℃的冰箱中保存。 1.3.2 乙腈溶液的蒸发 称取试样10g(精确至0.01g),置30mL带盖离心管中,加3mol/L醋酸缓冲液10mL,漩涡混合5～10min,加乙腈10mL,4 200r/min离心20min,取上清液,于残渣中加二氯甲烷15mL混匀,离心,合并两次提取液。 提取液中加正己烷10mL,二氯甲烷2mL,混匀,4 200r/min离心10min,移取中间层,40℃旋转蒸发至0.5mL,用乙腈洗瓶,合并洗液,40～50℃氮气吹干。用1mL乙腈溶解。 将上述溶液移入已活化的HLB固相萃取柱中,依次用5mL水、5mL甲醇/水(20/80,V/V)和5mL正巳烷淋洗萃取柱,用2mL甲醇洗脱,吹干,用0.5mL流动相溶解,过微孔滤膜,测定。 2 结果与分析 2.1 色度条件的确定 2.1.1 流动相中流动相的分离度的测试 利用既有的单一测定呋喃唑酮和地塞米松的方法为参考,先初步确定选用乙腈和水作为流动相中的成分,然后先选用50:50的比例进行测试,发现分离度不是很满意,然后不断的微调,直到乙腈︰水=40︰60时,标准物质的分离度为2.13而且峰形很清楚(见图1)。由此确定流动相的比例为乙腈+水(40+60,v/v)。 2.1.2 色谱条件的选择 流速的大小直接影响色谱柱及检测系统的压力、各组分的分离度、洗脱的时间,在流动相选定之后,需要选择最佳的分离度和最短分析时间的流速。流速太小,分析时间太长,色谱峰会很宽,流速太大,系统的压力太高,而且会致使各个色谱峰重叠并且容易损坏色谱柱。因此,本实验选择流速分别为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL/min进行实验,结果表明当流速在1.0mL/min时可以充分的满足实验的要求。 2.1.3 色谱峰的测定,是色谱峰的测定,是色谱柱温 在流动相和流速确定之后,检测柱温的选择可以控制色谱峰的检出时间,当柱温高的时候,色谱峰的检出时间会提前,当柱温低的时候,它会拖后。现在以2