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动物克隆的技术基础： 动物的细胞培养 和组织培养 植物克隆的技术基础： 植物组织培养 1 2 将动物体内的一部分组织取出 机械消化或胰酶消化 分散成单个细胞 放在适宜的培养基培养 细胞得以生存并保持生命活动现象 为什么要分散成单个细胞培养 ？ 生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等 3 一、动物细胞的培养和克隆形成 1、动物细胞培养 ( 1)定义 (一)动物细胞 接触抑制 正常细胞 癌细胞 4 (2) 动物细胞培养的条件 1)离体 2)营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、 动物血清 3)恒温和pH，无需光照 保证细胞顺利 的生长增殖 4)无菌无毒的环境 5 培养条件： 1. 培养基营养物质： 氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分(生长因子 【添加动物血清】 ) 2. 气体： CO2 O2【 CO2 培养箱： 5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用： 调节PH 3. 理化条件： PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质， PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】 、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱： 37℃， 湿度很高】 4. 无菌条件 5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁， 培养 皿的壁】 ，会接触抑制， 培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养， 悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。 6 ( 3)动物细胞的培养过程 取动物胚胎 或幼龄动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 单个细胞 因为这些组织或器官上的细 胞生命力旺盛，分裂能力强 分解组织中的胶 原纤维和细胞外 的其他成分 细胞培养 7 (4) 动物细胞生长特点： 1)贴壁生长： 培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养 瓶内壁才能生长； 2)接触抑制： 当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接 触时，细胞不再分裂； 3)细胞只分裂不分化。 ( 5) 动物细胞培养的结果： 不能最终培养成生物体,而是细胞群。 8 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独 特之处？ 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特 之处有： a、液体培养基 b、成分中有动物血清等 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体 ？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 思考： 9 大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体 的表面上生长和分裂。 贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的 现象。 要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成 悬浮液，分装多瓶再培养 贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。 5、培养的细胞为什么会贴壁生长？ 6、用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 7、若一直在卡氏瓶中持续培养会出现什么情况？ 分解胶原纤维等蛋白 10 (二)动物组织培养 1.概念： 动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。 动物组织培养过程中可以伴随组织分化。不管采用什么手段 和培养条件， 组织培养中主要生命活动成分仍然以细胞为单位的。 2.结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分也发生结 构和功能变异， 结果长期的培养经常只能使单一类型的细胞保存下 来，最终成了简单的细胞培养。 12 3.动物细胞培养和组织培养的联系 两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 (组培) ， 即代表各种生物体结构成分的体外培养。 广义的组织培养还包括器官培养， 即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。 13 动物细胞培养： 体外培养分散后的单个细胞， 使其得以生存， 并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。 动物组织培养： 体外培养动物组织， 使其维持