水体中耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法.pdfVIP

水质 耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法 1 范围 本文件规定了测定水中耐热大肠菌群的高效微生物生长分析仪法。 本文件适用于地表水、地下水、污水、废水和河口水（盐度≤2%）中耐热大肠菌群的快速测定。 本方法的检出限：10个/mL 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文 件。 GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 HJ 494 水质 采样技术指导 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 耐热大肠菌群 thermotolerant coliforms 在44.5℃培养能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 [来源：GB/T 5750.12-2023，3.3] 4 方法原理 将水样加入EC 肉汤（其中的胆盐三号抑制革兰氏阳性菌的生长而不抑制耐热大肠菌群的生长）中，44.5℃ 培养，耐热大肠菌群繁殖分解乳糖产酸产气。这个过程引起检测管中介质导电能力的变化。该变化由高效 微生物生长分析仪实时监测并自动化绘制“电导变化值-时间”动力学曲线，进而报告出可检测时间 （Detectable time, D ，单位为min ）。D 和水样中耐热大肠菌群数量呈负相关，将其代入公式D （min ）= t t t 2 -36.095Lg(C) + 509.42 （R =0.9598 ）计算待测水样中耐热大肠菌群的数量和浓度。 5 干扰和消除 1 5.1 活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1）时加入硫 代硫酸钠溶液（6.5）消除干扰。现场检测时无需此操作。 5.2 重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1）时 加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.6）消除干扰。现场检测时无需此操作。 6 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馏水或去离子水。 6.1 EC 培养基。 胰胨 20g 乳糖 5g 胆盐三号 1.5 g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5 g 氯化钠 5g 将上述成分或含有上述成分的市售成品加热溶解于 1000 mL 水中，然后分装于锥形瓶中，115℃高压 蒸汽灭菌 20 min ，灭菌后 pH 值应在 6.9 左右。 注：配制好的培养基 （6.1 ）避光、干燥保存，必要时在 5℃±3 ℃冰箱中保存，通常瓶装培养基不超过 3 个月。配制 好的培养基要避免杂菌侵入和水分蒸发，当培养基颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。 6.2 无菌水：取适量实验用水，经 121℃高压蒸汽灭菌 20 min ，备用。 6.3 硫代硫酸钠 （Na S O ·5H O）。 2 2 3 2 6.4 乙二胺四乙酸二钠 （C H N O Na ·2H O）。 10 14 2 8 2 2 6.5 硫代硫酸钠溶液：ρ （Na S O ）=0.10 g/mL 。 2 2 3 称取 15.7 g 硫代硫酸钠（6.3 ），溶于适量水中，定容至 100 mL ，临用现配。 6.6 乙二胺四乙酸二钠溶液：ρ （C