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n-3-氨基丙基苄胺-丹皮酚铜配合物的合成及应用 脱氧核糖（dna）是在生物遗传过程中起着决定性控制作用的材料。关于基本生物遗传因素的研究已成为生物学和生物化学的研究重点。为了更好地探索和理解dna的性质、结构、行为、形态和生命之秘密，我们研究了大量金属配合物与dna的反应，探讨了dna和金属配合物之间的反应机制。同时，我们研究了金属配合物分子结构与dna反应机制之间的关系，并为新的生物学研究工具项目和编制适合应用的低毒、高效、抗菌、肿瘤和其他药物提供了一定的科学研究基础和理论基础。 洛美沙星为第三代喹诺酮类,对革兰阳性及阴性菌均有很强抗菌活性,体内抗菌活性强于诺氟沙星。喹诺酮类抗菌药因其抗菌谱广、抗菌作用强、药物动力学性能好和耐受性好,从而扩大了适应症,用于各种感染的治疗。喹诺酮类药物是一种DNA旋转酶抑制剂,它作用于细菌DNA旋转酶,干扰DNA超螺旋结构的解旋,而阻碍DNA的复制,呈现杀菌作用。 本课题组一直从事丹皮酚及其衍生物结构、性质以及生物活性方面的研究,成功合成了多种含有丹皮酚的铜配合物并解析其结构。过渡金属铜配合物是一类重要的DNA靶向化合物,这类化合物可望设计成人工核酸酶,从而实现对DNA链上某些位点的特异性剪切;也有望设计并合成出某些性能优良的抗肿瘤或抗病毒药物。因此,研究含丹皮酚的铜配合物更具有一定的意义,因为丹皮酚本身也具有许多重要的药理性质。本文合成了N-(3-氨基丙基)苄胺-丹皮酚铜配合物,采用光度法研究该配合物-洛美沙星-DNA之间的相互作用,探讨了铜配合物与DNA、铜配合物与洛美沙星-DNA复合物之间的作用方式。 1 实验部分 1.1 红外光谱测试仪器 仪器:UV-2500 PC紫外-可见分光光度计(日本岛津);RF-5301PC荧光光度计(日本岛津);电子天平(BS210S Max210g d=0.1mg)(上海天平仪器厂);Spectrum One B型付立叶红外光谱仪,溴化钾压片。 试剂:0.1000mol LTris-HCl缓冲溶液(pH=7.33);小牛胸腺DNA是Sigma化学公司的产品;N-(3-氨基丙基)苄胺-丹皮酚铜配合物为自制;盐酸洛美沙星为分析纯。 1.2 实验方法 1.2.1 n-3-氨基丙基苄胺的合成 在100mL的圆底烧瓶中加Cu(ClO4)2·6H2O 0.371g(1mmol),丹皮酚0.166 g(1 mmol)加20mL无水甲醇溶解,搅拌,室温下滴加自制的N-(3-氨基丙基)苄胺(缩写为APBA)(1mmol),加热回流2 h后,冷却至室温。过滤,得深绿色固体,无水甲醇洗涤固体,室温干燥。熔点:196.6~197.9℃。用元素分析,红外光谱(见图1)等手段对配合物进行表征。 1.2.2 小鼠胸径和金属配合物的含量检测 Tris-HCl缓冲溶液配置:向500mL 0.1mol/L三-羟甲基-胺基甲烷水溶液中缓慢滴加0.1 mol/LHCl水溶液,混匀,用pH计调节溶液pH值至7.33。 DNA溶液的配置:称取适量的小牛胸腺DNA溶于缓冲溶液中,抽滤,滤液按需要稀释到一定浓度,测量260 nm和280 nm处吸收值,经UV谱检验,A 260/A280=1.8~1.9,表明基本上不含蛋白质,纯度符合要求。DNA浓度以碱基对摩尔浓度计,测量DNA在260 nm处的吸收光度,然后根据260 nm的吸光系数来确定DNA浓度。 样品溶液:称取一定量金属铜配合物样品,加适量DMF溶解,缓冲溶液定溶;铜配合物的浓度为1.0×10-4mol/ L。 盐酸洛美沙星标准贮备溶液:准确称取0.3129g盐酸洛美沙星溶于少量去离子水中,定溶于100mL容量瓶中,摇匀。使用时稀释成4×10-6mol /mL。 1.2.3 dna的紫外分光光度法检测dna 金属铜配合物-DNA的相互作用:在10 mL比色管中分别加入1.00 mL的铜配合物溶液、1.00 mL pH=7.33的缓冲溶液以及不同体积的DNA溶液,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,静置30 min,用紫外分光光度计扫描电子吸收光谱;铜配合物在不同浓度DNA存在时的电子吸收光谱见图2。 1.2.4 dna溶液及缓冲溶液 金属配合物-盐酸洛美沙星-DNA的相互作用:在10mL比色管中分别加入1.00mL的盐酸洛美沙星溶液,1.00mL的DNA溶液、1.00mL pH=7.33的缓冲溶液;然后分别加入0,1mL,2mL,3mL,4mL,5mL金属铜配合物溶液,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,静置30min,用紫外分光光度计扫描电子吸收光谱,结果见图3。 1.2.5 荧光光谱测定 在10 mL比色管中分别加入1.00 mL的盐酸洛美沙星溶液、1.00 mL的DNA溶液、1.00mLpH=7.33缓冲溶液不同体积的铜配合物溶液,以二次石英亚沸蒸馏水定容