开题的报告幻灯片.pptx

广西特有药用植物抗肿瘤作用物 质筛选 及药效学和毒理学的初步研究 导 师 刘华钢教授 2004级 罗丹 一 立论依据 本课题的研究背景及意义 • 目前 ， 天然化合物的开发研究越来越受到 重视 ， 其在化学结构的多样性、复杂性、 以及在生物活性方面的显著优势而成为发 现创新新药的捷径 • 广西天然药物资源丰富 ， 虽然中成药产品 品种较多 ， 但本地区地道传统中药品种在 中药有效性 、活性定位等方面研究还缺乏 系统性 ， 严重影响相关新药开发 、生产和 质量的控制。 • 目前用于临床的抗肿瘤药存在选择性差， 免疫抑制及不良反应多而严重等缺点 • 中药抗肿瘤以其多靶点 、 多环节 、 多效应 的特点 ， 同时其毒副作用低 ， 能提高机体 免疫力 ， 不易产生耐药性 ， 而成为近年来 研究的热点 • 本课题的研究将本地区地道传统中药品种 的抗肿瘤有效成分 、作用机理 、毒理及代 谢过程作为研究重点 ， 为新药开发过程中 的质量控制提供理论支持 ， 加速中药现代 化进程 ， 力争高效率的开发出具有自主知 识产权的中药新药和创新化学药品 • 白花丹（Plumbago ZeylanicaL）属蓝雪科蓝雪属 ， 别名 药用 。我国南部和西南部均有分布 ， 资源丰富 。广西民间 用于散疮、消肿、痛经活络、并治蛇伤、风湿、乳腺炎以 及慢性气管炎等症 。文献报道有抗肿瘤作用。 • 两面针 ， 又名入地金牛、入山虎、两背针 ， 来源于芸香科 根 ， 中国药典从1995年版开始收载 ， 为我国南方常用中药。 能行气止痛、活血化瘀、通络祛风 。主治跌打、风湿痹痛、 牙痛、 胃痛、毒蛇咬伤 ， 外用治汤火烫伤等 。其化学成分 主要有苯骈菲啶类生物碱、黄酮类、木脂素类等 。两面针 提取物的主要药理作用有抗炎、镇痛、抗肿瘤、解痉及心 血管系统等方面 植物两面针（Zanthoxylum n itidum (Roxb.)DC. ）的干燥 白雪花 ， 为亚灌木状草本 。味辛苦 ， 性温 ， 微毒 ， 全株供 本课题选用药物来源 • 对已筛选 、分离鉴定出的白花丹 、两面针 的抗肿瘤有效成分（单体） ， 从整体思想 出发 ， 运用配位化学的原理和组合化学的 方法使之与一些其金属配合物已被用于治 疗肿瘤的临床应用或临床试验的金属离子 或多金属氧盐 ， 合成系列金属配合物 ， 以 增加作用靶点 。 • 国内对白花丹研究不够系统 ， 对其有效成 分作用机理只是停留在简单药理作用研究 国外鲜见此方面研究报道。 • 国内对两面针研究主要集中在两面针碱提 取物的简单利用 ， 如消炎药 、两面针牙膏、 镇痛药等 。 国外对两面针的研究已处于领 先阶段 ， 如日本有些研究已达到临床试验 阶段 二 、研究目标 • 筛选出抗肿瘤活性较好的天然化合物和配 合物 ， 并初步给出这些天然化合物和配合 物的药效学和毒理学评价 ， 为进一步研究 临床应用的可能性提供依据 三 、研究内容 • 将合成的几十种天然化合物和配合物通过 对人类肿瘤细胞的生长抑制实验（ MTT法、 SRB法等） 快速筛选出有效的配合物 ， 求出 IC50确定进一步实验的配合物 • 进行体外毒理学实验 ， 通过原代培养的大 鼠肝细胞及骨髓细胞初步了解筛选有效的 天然化合物和配合物对正常肝细胞和骨髓 细胞的毒性作用 • 在合作单位提供合理的药物剂型的基础上 ， 进行急性毒性实验 、得出动物半数致死量 （LD50） 观察药物的中毒表现 • 采用小鼠荷瘤动物模型 ， 观察被试药物对肿 瘤的抑制作用 ， 摸索出有效的少毒剂量 ， 通 过计算得的肿瘤抑制率 ， 评价被试药物的抗 肿瘤效果 四、拟采用的研究方法、关键 技术指标及解决途径 ㈠ 针对白花丹、两面针分离出的天然化合物和用组合化学 的方法合成的金属配合物 ， 进行对人类肿瘤细胞的生长抑 制实验 • 肿瘤细胞的培养： 从国内或国外进口的人类肿瘤细胞株 RPMI1640培养基 ， 添加10% －20%胎牛或新生牛血清 ， 在 37℃ , 5％CO2 ， 环境培养箱培养。 • 体外药物敏感实验： 取对数生长期的各种肿瘤细胞 ， 以 细胞的在该浓度下的细胞生长抑制率 ， 以此为基础设立浓 度梯度分别应用SRB法、MTT法、集落形成实验法求出有 效药物的IC50以确定进一步实验的化合物。 某浓度通过MTT法快速得出各种被试药物相对于各个肿瘤 （KB 、SGC7901 、Hela 、A549 等） 采用DMEM或 ㈡对初步筛选出来的各种药物同时进行体内 和体外的毒理学实验 • 使用两步灌流法分离培养原代正常大鼠肝细胞 。通过测定培 养皿乳酸脱氢酶(LDH)的释放量来反映细胞膜的完整性 ， 即