第四章免疫学检测技术演示文稿.pptVIP

间接法的特点 本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。 间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗体检测相应抗体。 间接法成功的关键在于抗原的纯度。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质。若抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。 本文档共101页；当前第61页；编辑于星期六\13点0分 竞争法测抗原 本文档共101页；当前第62页；编辑于星期六\13点0分 操作步骤 ： （1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗 体洗涤。 （2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的 混合溶液，使之与固相抗体反应，孵育洗 涤。 （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原 最多，故颜色最深。待测管颜色越淡，表示标 本中抗原含量越多。参考管颜色深度与待测管 颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。 本文档共101页；当前第63页；编辑于星期六\13点0分 竞争法测抗体 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。 标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。 本文档共101页；当前第64页；编辑于星期六\13点0分 捕获包被法测抗体 样品中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法。 先将所有样品IgM（包括特异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。 本文档共101页；当前第65页；编辑于星期六\13点0分 操作步骤： （1）将抗IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗 IgM，洗涤。 （2）加入稀释的待测标本：孵育后样品中的IgM抗体被、 固相抗体捕获，洗涤。 （3）加入特异性抗原试剂：其仅与固相上的特异性IgM 结合，洗涤。 （4）加入针对抗原的酶标抗体：使之与结合在固相上 的抗原反应结合，洗涤。 （5）加底物显色：如有颜色显示，则表示标本中存在、 特异性IgM抗体，是为阳性反应。 本文档共101页；当前第66页；编辑于星期六\13点0分 本文档共101页；当前第67页；编辑于星期六\13点0分 亲和素-生物素-ELISA法 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。 生物素（biotin）又称维生素H，存在于蛋黄中。可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。 亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，形成一种极为稳定的复合体。 把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的敏感度。 　　 本文档共101页；当前第68页；编辑于星期六\13点0分 本文档共101页；当前第69页；编辑于星期六\13点0分 乙型肝炎血清学检验临床意义 乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种疾病。乙肝广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转化为肝硬化或肝癌。 传播途径：血液传播、性接触传播和母婴传播 本文档共101页；当前第70页；编辑于星期六\13点0分 HBV的抗原有3种：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是HBV感染以及检测的主要标志。 核心抗原是乙肝病毒核心颗粒的唯一结构蛋白。由于它存在于Dane颗粒核心结构表面，被表面抗原覆盖，故不易在血循环中检出。可刺激机体产生抗-HBc。 e抗原为可溶性蛋白质，在病理上认为是HBV复制以具有强感染性的一个指标。抗-HBe的出现，是预后良好的征象。 本文档共101页；当前第71页；编辑于星期六\13点0分 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗HBe 抗-HBc 临床意义 － － － － － 过去和现在均未感染HBV － － － － ＋ 曾感染HBV，急性感染恢复期 － － － ＋ ＋ 过去和现在均已感染过HBV － ＋ － － － 预防注射疫苗 － ＋ － ＋ ＋ 既往感染；急性HBV感染恢复期 － ＋ － － ＋ 既往感染；急性HBV感染已恢复 ＋ － － － ＋ 急性HBV感染；慢性HBsAg携带者 本文档共101页；当前第72页；编辑于星期六\13点0分 试验原理 作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定 5种成分，3个系统 反应系统（溶